مقايسه و بهينه سازي روش هاي جداسازي مايكوباكتريوم هاي غير سلي از آب هاي سطحي

Comparison and optimization of methods for isolation of Nontuberculous mycobacteriafrom surface water

سابقه و هدف: محيط زيست منبع احتمالي مايكوباكتريوم هاي غير سلي است كه در عفونت هاي انساني به ويژه ريه، پوست و عفونت بافت نرم دخالت دارند. كشت مايكوباكتريوم ها در محيط هاي كشت غني نياز به انكوباسيون طولاني مدت دارد كه رشد ميكروارگانيسم هاي تند رشد و آلوده كننده در اين محيط ها مانع از مشاهده كلني هاي مايكوباكتريومي روي محيط كشت مي شود. به منظور اندازه گيري ميزان شيوع NTM در اكوسيستم هاي مختلف آبزي ما سعي به استانداردسازي و مقايسه بسياري از روش هاي جداسازي مايكوباكتريوم هاي غير سلي در اكوسيستم هاي آبي پرداختيم كه قبلا شرح داده شده بودند. مواد و روش ها: تعداد 38 نمونه از آب هاي سطحي استان تهران جمع آوري شد. نمونه گيري آب در حجم ???-??? ميلي ليتر صورت گرفت. ظروف حاوي آب بلافاصله به آزمايشگاه انتقال يافت و مورد بررسي قرار گرفت. سه روش آلودگي زدايي (Tacquet-Tison, Cetylpridinium chloride, Petroff) براي جداسازي مايكوباكتريوم ها به صورت موازي براي هر 38 نمونه از آب هاي سطحي انجام شد. براي هر روش يك تركيب ويژه از روش ضد عفوني تعريف شد. اثر هر يك از روش ها با محاسبه ميزان آلودگي محيط هاي كشت، متوسط تعداد كلني مايكوباكتريوم هاي رشد كرده و تعداد گونه هاي مايكوباكتريومي مختلف جدا شده مشخص شد. درآخر براي تاييد جدايه هاي مايكوباكتريومي از تست PCR نيز استفاده شد. يافته ها: ضد عفوني با CPC به نظر مي رسد بهترين روش آلودگي زدايي باشد. اين روش از يك سو به طور معني داري ميزان ميكروارگانيسم هاي غير هدف را كاهش مي دهد و از سوي ديگر كمترين اثر مهاري را بر روي گونه هاي NTM مورد مطالعه دارد. نتيجه گيري: هدف ما براي بررسي روش هاي مختلف شناخته شده براي مهار رشد ميكروارگانيسم هاي غير هدف بود، با در نظر گرفتن اين مطلب كه روش بكار گرفته شده كمترين اثر مهاري را بر رشد NTM داشته باشد. مطابق با اين بررسي، روش آلودگي زدايي CPC مي تواند بهترين روش جداسازي مايكوباكتريوم ها ي غير سلي از نمونه هاي آب باشد.

Aim and Background: The environment is the likely source of most Nontuberculous mycobacteria (NTM) involved in human infections, especially pulmonary, skin, and soft tissue infections. In order to measure the prevalence of NTM in different aquatic ecosystems, we tried to standardize the isolation methods used for surface water testing since many procedures have been described previously. Cultivation of mycobacteria requires long-term incubation in rich media and inactivation of rapidly growing microorganisms whose growth impedes observation of mycobacterial colonies. Materials and Methods: 38 samples were collected from surface waters in Tehran. Water sampling was carried out in a volume of 200-100 ml. water sample was transferred immediately to the laboratory and examined. Three methods (Cetylpyridinium chlori, Petroff, Tacquet-Tison) for the isolation of mycobacteria were compared by applying them in parallel to 38 samples of surface water. Each method was defined by a particular combination of decontamination method. The efficacy of each method was determined by calculating the positivity rate, negativity rate, contamination rate, mean number of mycobacterial colonies grown and mean number of different mycobacterial strains isolated. The last value was determined by subjecting the isolates to PCR. Results: Decontamination with CPC appeared to be the best decontamination method, on the one hand, it significantly decreased the level of non-target microorganisms and, on the other hand, it was significantly less lethal for the NTM strains studied. Conclusion: Our goal was to measure the effects of various methods known to inhibit the growth of non-target microorganisms, while we also took into consideration the inhibitory effects of these methods on the growth of NTM. We propose that CPC procedure could be used for detection of NTM in aquatic samples.