بررسي تاثير ليزات پلاكتي بر ميزان تكثير و تمايز سلول‌هاي بنيادي مزانشيمي

The effect of platelet lysate on proliferation and differentiation of mesenchymal stem cells

سابقه و هدف: با توجه به موارد زياد استفاده از سلول‌هاي بنيادي و روند رو به افزايش آن و هزينهي بالاي استفاده از FBS و گزارش‌هايي از موفقيت ليزات پلاكتي بر ميزان تكثير و تمايز سلول‌هاي بنيادي مزانشيمي (Mesenchymal stem cells ? MSC) و عدم گزارش تجربه‌اي از آن در ايران، اين تحقيق به منظور تعيين تاثير ليزات پلاكتي نسبت به محيط حاوي FBS بر ميزان تكثير و تمايز سلول‌هاي بنيادي انجام شد. مواد و روش‌ها: تحقيق حاضر به روش تجربي انجام گرفت. پنج كيسه كنسانتره پلاكتي تاريخ مصرف گذشته از بيمارستان سينا تهيه گرديد. ليزات پلاكتي به وسيلهي عمل انجماد و ذوب كنسانتره پلاكتي تهيه و سپس سلول‌هاي مرده از ليزات پلاكتي به وسيلهي سانتريفيوژ جدا شد. به ليزات پلاكتي به دست آمده، ضد انعقاد هپارين براي جلوگيري از ژلاتينه شدن محيط كشت اضافه شد. سلول‌هاي بنيادي مزانشيمي از شركت فن‌آوري زيستي بن‌ياخته تهيه گرديد. ماهيت سلول‌ها به روش فلوسايتومتري تاييد و به صورت تصادفي در دو گروه شاهد (در مجاورت FBS) و آزمون (در مجاورت ليزات پلاكتي)، كشت داده شدند. تكثير، با شمارش سلولي و تمايز، در مجاورت محيطهاي تمايزي استيوبلاستي و آديپوسيتي به وسيلهي رنگ آميزي آليزارين- قرمز و Oil-Red O در زير ميكروسكوپ، مشاهده شد. يافته‌ها: تعداد سلول‌ها در روز 3 در گروه شاهد 2/0?104×2 و در گروه آزمون 3/0?104×3 (001/0P < )، و در روز 7 در گروه شاهد و آزمون به ترتيب 3/0?104×5 و 5/0?104×8 بود (001/0P < ). از نظر تمايز سلولي اختلافي وجود نداشت. نتيجه‌گيري: به نظر مي‌رسد كه ليزات پلاكتي از نظر تكثير سلول‌هاي بنيادي مزانشيمي بهتر از محيط FBS باشد و از نظر تمايزي سلول‌ها فرقي نخواهند داشت. مطالعات بيشتر در اين زمينه، توصيه مي‌شود.

Background and Aim: The dramatic increase has been reported in the use of stem cells, but FBS as a cell culture supplement for MSCs expansion, is very expensive. Human substitute supplement, like platelet lysate has a great impact on expansion and proliferation of MSCs. According to previous studies, no experiments have been conducted according to impact of platelet lysate on MSCs in Iran. In this study we examined the impact of platelet lysate on expansion and differentiation of MSCs compared to FBS. Materials and Methods: This study was experimental. Five expired units of platelet concentrates were prepared from Sina Hospital, Tehran, Iran. Platelet lysate was generated by freeze-thaw procedure. To remove membrane fragments, lysates were centrifuged, and 2 U/ml heparin was added to avoid gelatinization. MSCs were obtained from Stem Cell Technology Research Center. The cells were confirmed by flow cytometry, and separated in two randomly groups, test (in presence of platelet lysate) and control (in presence of FBS). MSCs proliferation performed by cell counting, and osteogenic and adipogenic differentiation was detected with Oil Red O and Alizarin Red staining, respectively. Results: The number of MSCs in control group and test group were 2×104 ? 0.2/?l and 3×104 ? 0.3/?l at day 3, and 5×104?0.3 and 8×104?0.5 at day 5 respectively (P < 0.001). There was no difference in cell differentiation. ‍Conclusion: It seems that platelet lysate has better impact on proliferation of mesenchymal stem cells than FBS, and no difference in cell differentiation. We recommend further studies.