تعيين بهترين زمان سلول‌كشي ديواره سلولي لاكتوباسيلوس كازيي و لاكتوباسيلوس پاراكازيي در رده سرطاني K562

The best time of cytotoxicity for extracted cell wall from Lactobacillus casei and paracasei in K562 cell line

زمينه و هدف: مطالعه حاضر به‌منظور تاثير ديواره سلولی به‌دست آمده از باكتری‌های لاكتوباسيلوس كازيی و لاكتوباسيلوس پاراكازيی به‌عنوان پروبيوتيك (جدا شده از روده ماهی كپور) بر مرگ سلولی رده سرطانی K562 كه در شرايط آزمايشگاهی انجام شد و نقش تراكم سلول‌های سرطانی بر نتايج حاصل از تست MTT [3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)2,5- Diphenyl tetrazolium Bromide] نيز بررسی گرديد.روش بررسی: برای اين منظور ابتدا باكتری‌ها در محيط كشت اختصاصی Man Rogosa Sharpe Agar (MRS) در شرايط بی‌هوازی كشت و پس از شستشو با بافر Phosphate Buffer Saline (PBS) به‌كمك دستگاه سونيكاتور شكسته شده و جهت جدا كردن ديواره سلولی از ساير تركيبات سانتريفيوژ شدند. سپس غلظت‌های 500، 1000، 2000 و 4000 ميكروگرم در ميلی‌ليتر از ديواره سلولی باكتری‌ها به‌طور جداگانه در محيط كشت Roswell Park Memorial Institute (RPMI) تهيه و خواص سلول‌كشی آن‌ها عليه رده سرطانی K562 در شرايط آزمايشگاهی در زمان‌های 12، 24، 48 و 72 ساعت و تراكم‌های 5000 و 10000 و 20000 از سلول‌های سرطانی با روش MTT سنجيده شد.يافته‌ها: نتايج نشان داد كه ديواره سلولی اين لاكتوباسيلوس‌ها به‌طور معنی‌داری (0246/0P=) باعث القای مرگ در سلول‌های سرطانی می‌شوند و با افزايش غلظت بر ميزان سلول‌كشی آن‌ها افزوده می‌شود. هم‌چنين مشخص شد تغيير تعداد سلول‌های سرطانی كه در معرض ديواره سلولی قرار گرفتند هيچ تاثيری بر نتايج حاصل از تست MTT ندارد (098/0P=).نتيجه‌گيری: بر اساس نتايج به‌دست آمده می‌توان نتيجه گرفت تاثير سلول‌كشی ديواره سلولی پروبيوتيك‌ها وابسته به گونه باكتری بوده و با افزايش غلظت ديواره سلولی بر ميزان آن افزوده می‌شود.

Background: The aim of this study was to evaluate the effect of extracted cell walls from Lactobacillus casei and Lactobacillus paracasei as probiotic bacteria (isolated from common carp intestine) on K562 and the role of cell concentration on the results of MTT [3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)2,5- Diphenyl tetrazolium Bromide] test.Methods: For this purpose, bacteria were cultured in specific medium (MRS broth) at anaerobic condition for 24-48 hour. After incubation period culture medium was centri-fuged, then the cells were washed twice with PBS buffer to remove additional medium. Finally, collected bacterial cell disrupted by Sonication and cell walls were separated from other components by centrifugation. After that, different concentrations of cell walls (500, 1000, 2000 and 4000 µg/ml) were prepared in RPMI medium for each bacteria, separately. Then anticancer properties of the cell walls were determined in vitro at 12, 24, 48 and 72 h, also the effect of K562 concentration was assayed with MTT technique.Results: The results showed extracted cell wall from both probiotic statistically (P=0.098) have anti turmeric properties in K562 and their properties will arise in relation with concentration. As well as, we found that the number of cell had not any affect on the result of MTT assay.Conclusion: We conclude that the cytotoxicity property of extracted cell wall is related in the type of bacteria, but this anticancer property would warrant further study on the clinical application of extracted cell wall.