مقايسه فيتوشيميايي و اثر ضدويروسي عصاره متانولي با فركسيون هاي اندام هوايي گياه شيرمال (Euphorbia Spinidens)

Phytochemical Study and Anti Viral Effect Evaluation of Methanolic Extract with Fractions of Aerial Parts of Euphorbia Spinidens

سابقه و هدف: برخي از گونه هاي جنس يوفوربيا (خانواده يوفوربياسه) به عنوان عوامل ضد ويروس و ضد تومور، مورد بررسي قرار گرفته اند. اكثر داروهاي ضد ويروس بر روي ويروس هرپس سيمپلكس يا تاثير كم دارند و يا همراه با عوارض زياد هستند. لذا اين مطالعه با هدف مقايسه نتايج فيتوشيميايي و اثر ضدويروسي عصاره متانولي با فركسيون هاي اندام هوايي گياه Euphorbia spinidens انجام شد. مواد و روشها: در اين مطالعه تجربي آزمايشگاهي عصاره متانولي بخش هاي هوايي گياه E.Spinidens با روش خيساندن فركسيون هاي كلروفرمي، بوتانولي و هگزاني تهيه و مورد استفاده قرار گرفت. جهت بررسي فعاليت آنتي اكسيداني و ميزان فنول و فلاونوييد تام در عصاره متانولي و فركسيون هاي اين گياه به ترتيب از روش بتاكاروتن لينوليات، فولين سيوكالتيو و روش رنگ سنجي كلريد آلومينيوم استفاده گرديد. اثرات سيتوتوكسيك و ضد ويروسي عصاره متانولي و فركسيون هاي گياه E.spinidens بر تك لايه سلول هاي Vero (سلول كليه ميمون) با استفاده از روش MTS (3-(4,5-dimethyl thiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)2H-tetrazolium) تعيين شد و ميزان غلظت كشندگي50% CC50 50%Cytotoxic Concentration)) و غلظت موثر50% EC50 (50% Effectiveness Concentration) آن ها بر ويروس هرپس سيمپلكس تيپ1(HSV-1) مورد ارزيابي قرار گرفت. يافته ها: بيشترين فعاليت آنتي اكسيداني و بالاترين ميزان تركيبات فنولي و فلاونوييدي گياه E.spinidens به ترتيب در فركسيون بوتانولي (576/0±33/59، 1±99 و 1±70)، عصاره متانولي (1±44، 1±70 و 996/0±96/49)، فركسيون كلروفرمي (996/0±33/33، 577/0±33/35، 996/0±33/25) و فركسيون هگزاني (146/1±66/19، 1±27 و 628/1±33/9) از اين گياه ديده شد. بيشترين ميزان CC50، در فركسيون هگزاني با mg/ml072/0±92/9 و كمترين ميزان CC50 در عصاره متانولي با mg/ml063/0±072/5 اندازه گيري شد. همچنين بيشترين فعاليت ضد ويروسي به ترتيب در فركسيون هاي بوتانولي (125/28:SI)، عصاره متانولي (85/15:SI)، فركسيون كلروفرمي (44/8:SI) و فركسيون هگزاني (07/2:SI) از گياه E.spinidens مشاهده شد. نتيجه گيري: نتايج مطالعه نشان داد كه عصاره متانولي و فركسيون هاي بوتانولي، كلروفرمي و هگزاني گياه E.spinidens داراي اثر ضد ويروس هرپس سيمپلكس تيپ 1 هستند، كه اثر ضد ويروسي مشاهده شده، به حضور متابوليت هاي ثانويه مختلف از جمله پلي فنول ها، فلاونوييدها، ترپن ها و ساپونين ها نسبت داده مي شود.

BACKGROUND AND OBJECTIVE: Several species of the genus Euphorbia (Euphorbiaceae) have been tested for their efficiency as anti-viral and anti-tumor agents. Herpes Simplex Viruses (HSV) are pathogenic to human. Antiviral drugs are mostly weak or are associated with side effects. Medicinal plant products have been used as folk remedies for different kinds of ailments including viral diseases. The objective of this study was to compare the phytochemical study and anti-viral effect evaluation of methanolic extract with fractions of aerial parts of euphorbia spinidens. METHODS: In this experimental and laboratory research the methanolic extract of aerial parts of E. spinidens with maceration method was subjected to solvent partitioning and afforded chloroform, butanol and hexane fractions. B-carotene-linoleate model system, folin-Ciocalteu method and aluminum chloride colorimetric method, respectively, were employed for evaluation of antioxidant activity, total phenolic, flavonoid and flavonol contents of the extract and fractions of this plant. The cytotoxic and anti-viral effects of methanolic extract and fractions were determined using MTS assay and the CC50) 50% cytotoxic concentration( and EC50 (50% effectiveness concentration) were evaluated on Herpes Simplex Virus Type-1. FINDINGS: The highest antioxidant activity and phenolic and flavonoid and contents were in buthanol fraction (59.33±0.576, 99±1, 70±1), methanolic extract (44±1, 70±1, 49.96±0.996), chloroform fraction (33.33±0.996, 35.33±0.577, 25.33±0.996) and hexane fraction (19.66±1.146, 27±1, 9.33±1.628) respectively. The highest CC50 was in hexan fraction with 9.92± 0.072 mg/ml and the lowest CC50 was in methanolic extract with 5.072±0.063 mg/ml. Also, the highest anti viral activity revealed in the butanol fraction (SI: 28.125), methanolic extract (SI: 15.85), chloroform fraction (SI: 8.44) and hexane fraction (SI: 2.07), respectively. CONCLUSION: Based on the results, methanolic extract and buthanol, chloroform and hexane fractions of E. spinidens show anti HSV-1 activity. Antiviral effect observed can be attributed the presence of various secondary metabolites, particularly polyphenols, flavonoids, terpenes and saponins.