تعيين هويت اعضا مايكوباكتريوم توبركلوزيس كمپلكس با استفاده از روش هاي ملكولي

Identification of Mycobacterium Tuberculosis Complex, Using Molecular Methods

زمينه و هدف: تشابه بسيار ميان ژنوم باكتري هاي مايكوباكتريوم توبركولوزيس كمپلكس، تـشخيص افـــتراقي آنها با روش هاي بيوشــيميايي مرسوم آزمايشگاهي را مشكل مي نمايد. اين تحقيق به منظور شناسايي و تعيين هويت جدايه هاي مايكوباكتريوم توبركولوزيس كمپلكس عامل بيماري در ميان مسلولين استان گلستان صورت پذيرفته است. روش بررسي: جدايه هاي جمع آوري شده از نمونه هاي كلينيكي 42 مسلول استان گلستان در محدوده زماني 1387 تا 1389 به موسسه رازي منتقل و بر روي محيط هاي كشت لونشتاين- جانسون گلسيرينه و پيرووات دار، تجديد كشت گرديدند. ژنوم همه جدايه ها به روش جوشانيدن استخراج و هويت جدايه ها توسط يك برنامهPCR سه مرحله اي به نام روش Huard-Warren شامل آزمون هاي 16SrRNA Rv Typing مشتمل بر لوكوس هاي Rv0577, Rv3877.8, Rv1970, Rv3120, Rv1510 , IS1561) و RD typing (شامل لوكوس هاي (RD1, RD4, RD9, RD12) تعيين گرديد. يافته ها: هويت همه جدايه ها مايكوباكتريوم توبركولوزيس تعيين شد و نشانه اي از آلودگي هيچ يك از بيماران به ساير اعضاي مايكوباكتريوم توبركلوزيس كمپلكس يا آلودگي هم زمان آنها به بيش از يك عضو كمپلكس مشاهده نگرديد. نتيجه گيري: با توجه به اهميت پرورش گاو و گوسفند در اقتصاد منطقه فقدان مايكوباكتريوم بوويس در ميان جدايه هاي بررسي شده تا حدودي غير منتظره به نظر مي رسد. همان گونه كه اين مطالعه نشان مي دهد روش هوارد– وارن كه انجام آن ساده و مقرون به صرفه مي باشد، مي تواند در هر دو گروه از آزمايشگاه هاي منطقه اي و همچنين مرجع در تشخيص افتراقي ميان اعضا مايكوباكتريوم توبركلوزيس كمپلكس به كار گرفته شود. واژه هاي كليدي: مايكوباكتريوم توبر كلوزيس كمپلكس، روشHuard-Warren، 16SrRNA، استان گلستان، RD typing، Rv typing

Background and Objective: A high level of homogeneity observed within all bacteria in the Mycobacterium tuberculosis complex makes a property that seriously challenges traditional biochemical-based identification methods of these pathogens in the laboratory. The work presented here was conducted to characterize Mycobacterium tuberculosis complex isolates in Golestan, Northern Iran. Material and Methods: Between 2008 and 2010, 42 mycobacterial isolates were collected from clinical tuberculosis-suspected patients in Golestan province. The isolates were sub-cultured on fresh Mycobacterium-specific culture media including glycerinated and pyruvated Lowenstein-Jensen slopes. The isolates were subsequently subjected to a PCR-based identification scheme coined Huard-Warren method. This strategy consisted of three individual algorithms namely, 16SrRNA; RV typing (Rv0577, Rv3877.8, Rv1970, Rv3120, Rv1510 and IS1561) and RD typing (RD1, RD 4, RD9 and RD12). Results: All isolates were proved to be M. tuberculosis. Furthermore, none of the patients were being infected with any other member of the M. tuberculosis complex or simultaneously co-infected with two mycobacteria. This fundamental observation was independently obtained by specific culture media, RV typing and also RD typing. Conclusion: Considering the fact that cattle and sheep farming play an important role in the economy of the region, absence of Mycobacterium bovis in the studied isolates can be unexpected to some extent. Huard-Warren which is a simple and cost-effective identification method can be used in both reference and regional laboratory for differential diagnosis of tuberculosis. Keywords: Mycobacterium Tuberculosis Complex, Huard-WarrenMethod, 16SrRNA, Golestan Province, RD Typing, RV Typing