تعيين اثر ضد قارچي باسيلوس هاي تجزيه كننده كيتين خاك

Antifungal Activity of Soil Chitinolytic Bacilli

زمينه و هدف: كيتين يك پليمر خطي از واحد هاي N-استيل گلوكز آمين است كه پس از سلولز فراوان ترين بيوپليمر در طبيعت به حساب مي آيد. در دهه هاي اخير كيتيناز ها به دليل كاربردهاي وسيع، به ويژه به عنوان كنترل زيستي برعليه قارچ ها مورد توجه زيادي قرار گرفته اند. روش بررسي: جداسازي باسيلوس هاي مولد كيتيناز با جمع آوري 40 نمونه خاك از چهار منطقه جغرافيايي گرگان انجام گرفت و ويژگي تجزيه كنندگي كيتين آنها با بررسي هاله شفاف در پليت هاي حاوي كيتين كلوييدي مشخص و مورد ارزيابي قرار گرفت. شناسايي سويه هاي منتخب بر اساس تاكسونومي پلي فازي انجام گرفت. استخراج DNA براي شناسايي دقيق تر و تعيين توالي انجام شد. اثر ضدقارچي با روش چاهك برعليه قارچ هاي Candida albicans، Aspergillus niger، Aspergillus flavus (IR 6)، Alternaria alternate و oxyporum Fusarium مورد ارزيابي قرار گرفت. يافته ها: تعداد 9 كلوني باسيلوس كيتيناز مثبت از پليت هاي كلوييدال كيتين آگار جدا شد كه 5 مورد از آنها اثر ضدقارچي از خود نشان دادند ودر اين بين سويه R6بيشترين اثر، R2 و R3 كم ترين اثر را روي قارچ ها نشان دادند. مقايسه توالي 16S rRNA اين جدايه ها با باكتري هاي شناخته شده، تشابه ژنتيكي حدود 95-97 درصد را نشان دادند. نتيجه گيري: برخي باكتري خاك مي توانند با عوامل بيماري زايي انساني و گياهي خاك اثرات متضاد داشته باشند. واژه هاي كليدي: باسيلوس، كيتيناز، خاك، ضد قارچ

Background and Objective: Chitin, which is a linear polymer of N-acetyl glucosamine residues, has been the most abundant polymer in nature after cellulose. In recent decades, Chitinases have received increased attention because of their wide range of applications, especially in biological control against fungi. Material and Methods: the isolation of bacilli producing chitinolytic enzymes was performed by collecting 40 soil samples from various regions of Gorgan, northern of Iran. The chitinolytic potential of the isolates was indicated by observation of clear zone in colloidal chitin agar medium. Identification of selected strains was performed by polyphasic taxonomy, and subtler identification and sequensing were carried out by extraction DNA. Antifungal effect was evaluated by well method against Candida albicans (ATCC 10231) Aspergillus niger (ATCC 2029)،Aspergillu sflavus (IR6) Fusarium oxyporum (PTCC 5115) and Alternaria alternata (PTCC 5224). Results: Nine colonies of chitinase positive bacillus were isolated on choloidal Chitin Agar (CCA) and five of them had antifungal effect. R6 strain had the highest, and R2 and R3 had the lowest effect on fungi. The 16S rRNA sequence of these isolations in comparison with the known bacteria has 95-97% similarity. Conclusion: Some of the soil bacteria can have antagonestic effects on human and phytopathogenic agents existed in soil. Keywords: Bacillus; Chitinase; Soil; Antifungal