بررسي الگوي بيان ژن گيرنده فاكتور رشد شبه انسولين-1 تحت تاثير فاكتور نكروز تومور-آلفا در سلول هاي بنيادي مزانشيمي مشتق از مغز استخوان انسان

Gene expression pattern of insulin-like growth factor–i receptor induced by tumor necrosis factor-α in human bone marrow derived mesenchymal stem cells

مقدمه و هدف: نارسايي هاي حاد كبدي از جمله بيماري هاي مهم كبدي محسوب مي شوند كه خطر مرگ و مير آن ها بسيار بالا مي-باشد. پيشنهاد شده است كه سلول درماني جايگزين مناسبي به جاي پيوند كل كبد، در درمان نارسايي هاي حاد كبدي مي باشد. سلول-هاي بنيادي مزانشيمي يكي از مهم ترين سلول ها در زمينه سلول درماني هستند كه از منابع مختلفي از جمله مغز استخوان به دست مي آيند. فاكتور رشد شبه انسولين-1 (IGF-I) پس از اتصال به گيرنده خود (IGF-IR) در ترميم بافت كبد تاثير به سزايي دارد. ما در اين تحقيق به بررسي الگوي بيان ژن IGF-IR در سلول هاي بنيادي مزانشيمي مشتق از مغز استخوان انسان تحت تاثير فاكتور نكروز تومور-آلفا (TNF-?) پرداخته شده است. روش كار: پس از استخراج سلول هاي بنيادي مزانشيمي از حدود 5 ميلي ليتر مغز استخوان افراد دهنده سالم مراجعه كننده به بخش پيوند مغز استخوان بيمارستان نمازي شيراز (پس از اخذ رضايت نامه)، سلول ها جداسازي و كشت شدند. شناسايي آن ها با شيوه فلوسايتومتري انجام گرفت. سلول هاي پاساژ چهارم با مقدار ng/mL1 در زمان هاي مختلف (2، 10 ، 24 و 48 ساعت) تحت تاثير فاكتور التهابي TNF-? تيمار شدند. ميزان بيان ژن IGF-IR در سلول هاي بنيادي مزانشيمي تيمار نشده و تيمار شده با TNF-? با روش Real Time-PCR مورد بررسي قرار گرفت. يافته ها: نتايج آناليز فلوسايتومتري نشان داد كه سلول هاي بنيادي مزانشيمي نسبت به بيان ماركر CD90 مثبت بودند، در حالي كه نسبت به بيان ماركرهاي CD45و CD80منفي مي باشند. در سلول هاي بنيادي مزانشيمي تيمارشده با TNF-? نسبت به گروه كنترل افزايش بيان ژن IGF-IR مشاهده شد. بيشترين ميزان بيان ژن IGF-IR در گروه سلولي تيمارشده با ng/mL1 فاكتور التهابي به مدت 10 ساعت به دست آمد. نتيجه گيري: الگوي افزايش بيان ژن IGF-IR در سلول هاي بنيادي مزانشيمي مشتق از مغز استخوان انسان تحت تاثير TNF-?، از يك رفتار وابسته به زمان تبعيت مي كند. اين نتيجه مي تواند در آينده در زمينه سلول درماني نارسايي هاي حاد كبدي كاربرد كلينيكي داشته باشد.

Inroduction & Objective: Acute liver failure (ALF) is a severe liver injury accompanied by sustained liver damage. It is imperative that new approaches for repairing the liver are developed. Cell-based therapy has been implicated in the treatment of liver diseases. Mesenchymal stemcells (MSCs) from various sources such as bone marrow are available. These cells are one of them ajorcandidates incell therapy. The production of insulin-like growth factor-I (IGF-I) increases in the regenerating liver. The IGF-I in liver regeneration is effective after binding to insulin-like growth factor-I receptor (IGF-IR). We hypothesized that tumor necrosis factor-? stimulate MSCs to cause IGF-IR expression. Materials and Methods: Bone marrow was aspirated from human normal donor after informing consent. Cells were isolated and cultured. Identification of cells with flow cytometric analysis was performed. Fourth passage cells were treated with tumor necrosis factor-? (TNF-?)at 1 ng/mL dose and incubated at different times (2, 10, 24 and 48 hours). The IGF-IR gene expression was investigated using real time-polymerase chain reaction technique. Results: Flow cytometric analysis showed that the human bone marrow MSCs were positive for CD90 and negative for CD45 and CD80. The IGF-IR gene expression was increased in TNF-? treated in comparison with untreated cells. Conclusion:Increase gene expression pattern of IGF-IR in human bone marrow derived MSCs may be used for clinical stem cell therapy in ALF.