بررسي اثر داربست مثانه گوسفند نژاد اهلي بر روي سلول هاي بلاستما در شرايط برون تني

The Study of the Effect of Ovine Bladder Scaffold of Sheep, Domesticated Breed, on Blastema Cells In Vitro

مقدمه و هدف: داربست هاي زيستي كه از ماتريكس خارج سلولي تشكيل شده اند قابليت تسهيل تجديد ساختار در تعداد زيادي از بافت-ها را دارا مي باشند. اين مطالعه به منظور بررسي اثر القايي داربست مثانه گوسفند نژاد اهلي بر روي سلول هاي بافت بلاستما در شرايط برون تني انجام شد. روش كار: ابتدا مثانه گوسفند با قرارگيري در SDS يك درصد به مدت 24 ساعت همراه با چرخش آرام كاملاً سلول زدايي شد. سپس به منظور تهيه بافت بلاستما با پانچور مخصوص لاله هاي گوش خرگوش نر نژاد نيوزيلندي پانچ و حلقه بلاستمايي حاصل شد. در ادامه داربست سلول زدايي شده در شرايط استريل در مركز حلقه بلاستما قرار گرفته و به محيط كشت انتقال داده شد. سپس جهت مطالعات ميكروسكوپ نوري از رنگ هاي هماتوكسيلين ايوزين و پيك انديگو و آبي تولوييدين استفاده شد. هم چنين تعدادي از نمونه هاي روزهاي 15 و 20 براي مطالعه با ميكروسكوپ الكتروني گذاره آماده سازي شد. يافته ها: رشته هاي كلاژن در ماتريكس مثانه بعد از سلول زدايي حفظ شده بودند. در روزهاي 15 و 20 كشت بيشترين مهاجرت سلول-هاي بلاستمايي به داربست مثانه ديده شد. در روز 10 و 15 كشت تعدادي سلول نابالغ در مسير تمايز به سلول هاي فيبروبلاست و آديپوسيت مشاهده شد. در روز 15 كشت تمايز سلول هاي بلاستما به سلول هاي پوششي و در روز 20 كشت تمايز آن ها به سلول هاي فيبروبلاست و آديپوسيت مشاهده گرديد. نتيجه گيري: داربست مثانه قابليت القاي سلول هاي بلاستمايي را دارد و باعث مي شود سلول هاي بلاستمايي علاوه بر مهاجرت به آن به انواعي از سلول ها تمايز يابند اين رويداد با توجه به آن كه از هيچ عامل رشد و محرك ديگري در محيط كشت استفاده نشده بود حايز اهميت است.

Introduction & Objective: Biological scaffolds, composed of Extra Cellular Matrix (ECM), are capable of facilitating the restructuring of a large number of tissues. The objective of this study was to investigate the effect of ovine bladder scaffold of sheep, domesticated breed, on blastema cells in vitro Materials and Methods: At first, ovine bladder o the sheep was decellularized by putting in 1% wt/vol solution of sodium dodecyl sulfate (SDS) for 24 hours. Then to prepare the blastema tissue, the pinna of New Zealand rabbit was manually punched-hole with a special puncher and a circular blastema was separated. There after, the decellularized samples were put in the middle of blastema ring and were transfered to the culture medium. To continue the study, microscope with lights of hematoxylin & eosin and pick indigo and Toluidine blue staining was used. Some samples on the day 15 and 20 of culture were studied by transitional electron microscope. Results: Collagen fibers were preserved after decellularized in matrix of bladder. Most migration of blastema cells occurred on days 15 and 20 of culture. On the day 10 and 15, some immature cells were differentiation in the pathway of adipocyte and fibroblast. On the day 15th and 20th, more blastema cells were migrated to the ovine scaffold. On the 10th and 15 day immature cell culture was seen to be differentiated from fibroblast and adipocyte cells. On the 15 th day blastema cell culture differentiated from covering cells and on the 20th day from fibroblast and adipocyte cells were seen. Conclusion: Bladder scaffold has ability to induce blastema cells and causes not only blastoma cells’ migration but also to be changed to different cells. This phenomenon is very important because of no growth factor and inducer was used in culture medium. Key word: Bladder, Blastema , Decellularization , Scaffold, Differentiate