تشخيص مولكولي ژن بتالاكتامازblaCTX-M در سويه هاي كلبسيلا پنومونيه جدا شده از نمونه هاي باليني

Identification of bla-CTX-M B-lactamase in Klebsiella pnumoniae clinical isolates by polymerase chain reaction

سابقه و هدف: امروزه باكتري هاي توليد كننده آنزيم هاي بتالاكتاماز وسيع‌الطيف (ESBL) در سراسر جهان رو به افزايش هستند. توليد اين آنزيم ها مهم ترين عامل مقاومت به سفالوسپورين هاي وسيع الطيف در كلبسيلا پنومونيه مي باشد. در طي دهه گذشته آنزيم هاي نوعCTX-M شايع ترين نوع بتالاكتامازهاي وسيع الطيف را در اروپا، كانادا و آسيا به خود اختصاص داده اند. هدف از اين مطالعه بررسي ميزان فراواني باكتري هاي كلبسيلا پنومونيه توليد كننده بتالاكتاماز وسيع الطيف و شناسايي ژن CTX-M به روش مولكولي بود. روش بررسي: در اين مطالعه توصيفي، 100 نمونه كلبسيلا پنومونيه جدا شده از بيماران بستري در بيمارستان هاي بعثت و امام رضا شهر تهران با تستهاي بيوشيميايي استاندارد تشخيص داده شد و ميزان حساسيت آنها نسبت به 10 آنتي‌بيوتيك مورد استفاده در درمان باكتري هاي گرم منفي با روش ديسك آگار ديفيوژن مشخص گرديد. همچنين سويه هاي توليد كننده ESBL، با استفاده از روش ديسك تركيبي شناسايي گرديدند. سپس سويه هاي توليد كننده آنزيم هاي گروه CTX-M-I به كمك روش PCR مشخص شدند. يافته ها: 26 باكتري كلبسيلا پنومونيه از 100 نمونه كلبسيلا مورد بررسي، توليد كننده ESBL بودند و در بررسي مولكولي، 42 نمونه باكتري كلبسيلا پنومونيه حاوي ژن CTX-M بودند. نتيجه گيري: با توجه به تفاوت مشاهده شده بين نتايج بررسي هاي فنوتيپي و ژنوتيپي، شناسايي مولكولي ژن هاي مقاومت دارويي ضروري به نظر مي رسد. در ضمن مطالعات بيشتري جهت مشخص شدن اپيدميولوژي سويه هاي مولد ESBL در ايران لازم است.

Background: The incidence of extended-spectrum B- lactamase- producing bacteria has been increased worldwide. The most common cause of resistance to extended-Spectrum cephalosporins in Klebsiella pneumoniae is the production of extended-spectrum beta lactamases (ESBLs). In the past decade, CTX-M enzymes have become the most prevalent ESBLs in Europe, Canada and Asia. The aim of this study was to find the prevalence of ESBL-producing K .pneumoniae and molecular detection of CTX-M group in these bacteria. Materials and methods: In the descriptive study, 100 K. pneumoniae isolates were detected by standard biochemical tests between April 2012 and September 2012, in Besat and Imam Reza hospitals of Tehran, Iran. Susceptibility to antimicrobial agents was tested for 10 antibiotics by the disk agar diffusion (DAD) method. Also, ESBL production was screened by combined disk diffusionas recommended by the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Then, Screened isolates were assayed by PCR for detection of CTX-M-1 group genes. Results: Of 100 K. pneumonia isolates, 26 isolates produced ESBLs, and also 42 isolates were CTX-M-1 producer using PCR method. Conclusion: According to the differences between the results of phenotypic and genotypic tests, it seems that molecular detection of drug-resistance genes is necessary. Further investigations are needed to determine the epidemiology of ESBL producing K. pneumoniae in Iran.