پاكسازي زيستي آب هاي آلوده به نفت خام توسط باسيلوس هاي جدا شده ازحوضچه هاي نفتي

Bioremedation of water contaminated with crude oil per isolatin Bacillus from oily pound

سابقه و اهداف:آب هاي آلوده به نفت خام يا تركيبات نفتي يكي از معضلات محيط زيست اند. پاكسازي زيستي يك روش ساده و اقتصادي براي تصفيه آب هاي آلوده به اين آلاينده هاست. هدف از اين تحقيق بررسي قدرت تجزيه نفت خام توسط باسيلوس هاي جداسازي شده از آب هاي آلوده به نفت خام پالايشگاه نفت اصفهان مي باشد. روش بررسي:براي اين منظور از آب هاي آلوده به نفت خام در پالايشگاه نفت اصفهان استفاده شد. نمونه هاي برداشت شده بر روي محيط MSM كشت داده شده و به آن 10000 ppm نفت به عنوان تنها منبع كربني باكتري ها اضافه شد.اين محيط كشت بر روي تكان دهنده اي با دور 150 rpm و دماي 35 درجه سانتي گراد گرماگذاري شد. براي جداسازي باكتري‌هاي مولد بيوسورفكتانت، از بررسي فعاليت هموليتيك به عنوان اولين معيار جداسازي و غربالگري استفاده شد. براي بررسي قدرت تجزيه نفت خام هر3 سويه خالص شده و كنسرسيوم اين3 سويه تست هاي IR(مادون قرمز) و)GC-MSگاز كروماتوگرافي-اسپكترومتر)گذاشته شد. باسيلوس هاي خالص شده با روش هاي تشخيصي بيوشيميايي و ملكولي شناسايي شدند. يافته ها:از بين 12 سويه جداسازي شده، 8 سويه قادر به ليز نمودن اريتروسيت‌هاي گوسفند و توليد هاله هموليز برروي محيط بلاد آگار بودند. سويه‌هاي داراي فعاليت هموليتيك براي مطالعات بعدي انتخاب گرديدند. كشش سطحي 3 سويه قابل پذيرش بود.كنسرسيوم اين 3 سويه نيز از نظر توليد بيوسورفكتانت بررسي شد ومقادير 38 ،30،34mN/m براي 3 سويه خالص شده و 28mN/m براي كنسرسيوم اين 3 سويه بدست آمد. هنگامي‌كه توا لي فوق در برنامه BLAST قرار گرفت، نتايج نشان دهنده تشابه 8/99 درصد باكتري هاي جدا شده با Bacillus subtilis وBacillus cereus بودند.دو سويهBacillus subtilis شناسايي شده تنها در 6 نوكليوتيد با هم تفاوت داشتند. نتيجه گيري:بررسي هاي انجام شده نشان داد، عملكرد كنسرسيوم در تجزيه زيستي بسيار موثرتر از كشت باسيلوس ها به تنهايي بوده، در واقع كنسرسيوم باسيلوس ها با قدرت بيشتري نسبت به باسيلوس ها به تنهايي در تجزيه زيستي نفت خام در آب هاي آلوده عمل كرده است

Background:Water poluted with crude oil or oil materials are one of the life enviorenment. Bioremedation is a simple method and economical for cleaning poluted water.the aim of this survey is to check the degradation of crude oil power with separated Bacillus from crude oil in Isfahan oil refinery. Methods:For this purpose polluted water with crude oil is used in Isfahan oil refinery.choosing cases were cultured in the MSM medium and 10000 ppm oil are used in this as an only carbonated bacteries sources.this cultured medium was incubated in a shaker with 150 rpm and 35? tempreture. For separating generating biosurfactant bacterias,checking hemolytic activity as the first norm of separating and isolating.for checking the strength of crude oil degradation purified three strains and this three strain,s consortium put IR (infrared rey) test and GC-MS(gas chromatography - spectrometry). Purified Bacillus are reganized with biochemical and molecular diagnostic methods. Results :Among twelve strains separating,eight strains were been able to lysis sheep erythrocytes and make hemolysis halo on medium blood agar.strains that had hemolytic activity were choosen for later studying. Surface tension of three strains were acceptable.the consortium of this three strains was surveyed on Biosurfactant out put and purified three strains got numbers of 38,30,34 mN/m and consortium got 28 mN/m.when sequences above put in the BLAST program,the results showed similarity of 99.8 percent of separated bacterias with Bacillus subtilis and Bacillus cereus. Identified two Bacillus were only defferent in to six nucleotid. Conclusion :The surveys showed that consortium function in the biodegradation is more effective of Bacillus culture was alone,in fact consortium worked effectively in comparison with only Bacillus in the crude oil biodegradation on the polluted waters