توليد پروتيين نوتركيبCagA هليكوباكترپيلوري

Production of recombinant CagA protein of Helicobacter pylori

چكيده زمينه و هدف: هليكوباكتر پيلوري باسيلي‎گرم منفي است كه موجب بيماري‎هاي معده و ديودنوم در انسان مي‎شود. از مهم‎ترين ژن‎هاي مرتبط با بيماري‎زايي اين باكتري ژن CagA مي‎باشد كه موجب كلونيزاسيون بيشتر آن در سلول‎هاي اپي تليال معده و ايجاد التهاب و زخم‎هاي گوارشي مي‎گردد. هدف از اين مطالعه توليد پروتيين نوتركيب حاوي ناحيه داراي بالاترين خاصيت آنتي ژنيك CagA در باكتري E. coli مي باشد. مواد و روش‎ها: در اين مطالعه تجربي، قطعه حاوي ناحيه آنتي ژنيك ژن CagA به طول 1245 جفت باز براساس برنامه‎هاي بيوانفورماتيكي به دست آمد. سپس با روش PCR تكثير، با آنزيم‎هاي محدود كننده BamHI و XhoI برش و در پلاسميد pET32a كلون و در E. coli BL21 (DE3) pLysS با القا توسط IPTGبيان شد. از كيت Ni-NTA جهت تخليص پروتيين بيان شده استفاده شد و آنتي ژنيسيته آن به روش لكه‎گذاري وسترن بررسي گرديد. يافته‎ها: نتايج حاكي از كلونينگ و بيان موفقيت‎آميز ژن هدف بود. در وسترن بلاتينگ پروتيين توليد شده با سرم‎هاي آلوده انسان و موش واكنش نشان داد. نتيجه‎گيري: نتايج نشان داد كه پروتيين نوتركيب CagA (65 كيلو دالتون) آنتي ژنيسيته خود را حفظ مي‎كند. بنابراين مي‎تواند براي تشخيص سرولوژيك بيماري‎هاي هليكوباكتر پيلوري و توليد واكسن مورد استفاده قرار گيرد. واژگان كليدي: كلونينگ، پروتيين CagA، هليكوباكتر پيلوري، پروتيين نوتركيب

Abstract Background: Helicobacter pylori (H. pylori) is a gram negative bacilli that causes the stomach and duodenum diseases in human. An important virulence factor of H. pylori is CagA gene which increases the colonization in stomach epithelial cells and lead to inflammation and peptic ulcers. The aim of the present study was to produce recombinant protein containing highly antigenic region of CagA in E. coli. Materials and Methods: In this experimental study, the antigenic region of CagA gene with 1245 base pair was detected by bioinformatics methods, proliferated by PCR method, digested by BamHI and XhoI restriction enzymes and cloned into pET32a plasmid and was expressed in the E. coli BL21 (DE3) pLysS with induction by IPTG. The expressed protein was purified with Ni-NTA kit and its antigenicity was studied by western blotting method. Results: Data showed the successful cloning and expression of the target gene. In western blotting, the produced protein interacted with infected human and mice sera. Conclusion: Results indicated that recombinant CagA protein (65 KDa) maintained its antigenicity, so could be used for serological diagnosis of H. pylori diseases and production of vaccine. Keywords: Cloning, CagA protein, Helicobacter pylori, recombinant proteins