تاثير غلظت اسپرم و شرايط بلوغ و لقاح آزمايشگاهي تخمك گاوهاي تحت تنش گرمايي بر ميزان پلياسپرمي در زيگوتهاي حاصل

Effect of sperm concentration and condition of in vitro maturation and fertilization of oocytes of under heat stress bovine on polyspermy in derived zygotes

اثرات منفي ناشي از تنش گرمايي بر باروري يكي از مهمترين مشكلات اقتصادي صنعت گاو شيري است. تنش گرمايي در دورهي رشد فوليكولي ميتواند با كاهش كيفيت تخمك و توان تكوين آن در ارتباط باشد. هدف از اين مطالعه بررسي عوامل موثر بر كاهش ميزان پلياسپرمي در شرايط تنش حرارتي است. بدين منظور تغييراتي در غلظت اسپرم، محيط بلوغ و لقاح براي كاهش ميزان پلياسپرمي صورت گرفت. در ابتدا سه غلظت 106×5/0، 106×75/0 و 106×1 اسپرم در ميليليتر محيط لقاح مقايسه و مشخص شد كه هر سه غلظت اسپرم از لحاظ ميزان پلياسپرمي تفاوت معنيداري با يكديگر ندارند (05/0 < p). اما در غلظت 106×5/0 در ميليليتر بهطور معنيداري ميزان تخمكهاي لقاح نيافته افزايش يافت (001/0 > p). بنابراين براي آزمايشهاي بعدي غلظت اسپرم 106×75/0 در ميليليتر مورد استفاده قرار گرفت. در آزمايش بعد، اثر كاهش ميزان غلظت سرم جنيني گاو (FBS) در محيط بلوغ مورد بررسي قرار گرفت. نتايج نشان داد كه تفاوت معنيداري بين غلظتهاي 10 و 20 درصد FBS در ميزان پلياسپرمي وجود ندارد (05/0 < p)؛ همچنين كاهش ميزان هپارين به 1 ميكروگرم در ميليليتر محيط لقاح، اثر معنيداري بر كاهش ميزان پلياسپرمي ندارد (05/0 < p). با حذف برخي اسيد آمينههاي غيرضروري از محيط لقاح، ميزان پلياسپرمي كاهش و نرخ تسهيم و بلاستوسيست و بلاستوسيست تفريخ شده افزايش يافت (05/0 > p).

Infertility due to heat stress is one of the great economic problems in dairy industry. Heat stress at the earliest stages of follicular growth can affect the oocyte quality and developmental competence. The objective of this study was to determine factors which may have role to reduce of polyspermy in heat stress condition. For this propose, some changes in sperm concentration, maturation medium, and fertilization medium were done. In first step, three concentrations of sperm (0.5×106, 0.75×106 and 1×106) were selected. Results showed that with decrease in sperm concentration, polysermic rate did not significantly changed (p > 0.05). But in 0.5×106 sperm concentration, fertilization rate significantly decreased (p < 0.001). So, for next steps 0.75×106sperm was used. In second experiment, fetal bovine serum in two concentrations (10 or 20%) was added to maturation medium. Result did not show any difference between these two groups in polyspermic rate, normal fertilization, and total zygote (p > 0.05). In the next step, adding two different levels of heparin (1 or 10 µg/ml) in fertilization medium was evaluated. The fertilization parameters did not affected by both concentrations of heparin (p > 0.05). In last experiment, non-essential amino acid was removed from fertilization medium. Polyspermic rate was reduced to less than 15% in non-amino acid group. The cleavage, blastocyst, hatched blastocyst rates significantly promote in group without amino acid (p < 0.05).