بررسي اثر افزايش cAMP بر فسفوريلاسيون پروتيين BAD در رده‌ي سلولي لوسمي لنفوبلاستيك حاد پيش سازB- (NALM-6) تيمارشده با دوكسوروبيسين

The Effect of Elevated cAMP Levels on Phosphorylation of Bcl-2-Associated Death Promoter Protein in Pre-B Acute Lymphoblastic Leukemia Cell Line (NALM-6) Treated with Doxorubicin

زمينه و هدف: پروتيين BAD (Bcl-2-associated death promoter) عامل پروآپوپتوتيك بوده كه در حالت فسفريله، عملكرد آپوپتوزي آن خاموش و در حالت غيرفسفريله از طريق اتصال و مهار پروتيين BCL-XL باعث پيشروي آپوپتوز در سلول‌ها مي‌شود. تركيبات افزايش?دهنده‌ي cAMP، آپوپتوز القاشده توسط دوكسوروبيسين كه نوعي داروي ضدتوموري است را كاهش مي‌دهند. هدف از اين مطالعه بررسي اثرات عوامل افزايش دهنده cAMP داخل سلولي فورسكولين و IBMX بر فسفريلاسيون پروتيين BAD در سلول‌هاي لوسمي لنفوبلاستيك حاد بود. روش بررسي: سلول‌هاي رده‌ي لوسمي لنفوبلاستيك حاد پيش‌ساز B با عوامل افزايش دهنده‌ي cAMP به همراه داروي دوكسوروبيسين 250 و 500 نانو مولار به‌مدت 24 ساعت مجاور شدند. براي بررسي مرگ سلولي از رنگ آميزي تريپان بلو و براي ارزيابي ميزان آپوپتوز از رنگ آميزي Annexin V-FITC با فلوسايتومتري استفاده شد. از تكنيك وسترن بلات براي بررسي بيان پروتيين BAD و تغييرات فسفوريلاسيون استفاده گرديد. بررسي داده‌ها با آزمونPaired T- Test انجام شد. يافته‌ها: بررسي فلوسايتومتري كاهش معنادار آپوپتوز را در نمونه‌هاي تيمار شده با عوامل افزايش دهنده‌ي cAMP و دوكسوروبيسين در مقايسه با سلول‌هاي تيمار شده با دوكسوروبيسين به تنهايي نشان داد. نتايج وسترن بلات نشان داد كه عوامل افزايش دهنده‌ي cAMP سبب فسفوريلاسيون پروتيين BAD ‌گردد، همچنين داروي دوكسوروبيسين به تنهايي قادر به تغييراتي در فسفوريلاسيون پروتيين BAD نيست. نتيجه‌گيري: يافته‌هاي اين مطالعه نشان داد كه عوامل افزايش دهنده‌ي cAMP آپوپتوز القاشده با دوكسوروبيسين را از طريق فسفوريلاسيون پروتيين BAD در رده سلولي NAMLM-6 كاهش مي‌دهد. واژگان كليدي: cAMP، لوسمي لنفوبلاستيك حاد، دوكسوروبيسين، فورسكولين، IBMX.

Background and Objective: BAD (Bcl-2-associated death promoter) is a proapoptotic protein which in phosphorylated state is inactivated in terms of its apoptotic function while in dephosphorylated status causes proceeding of apoptosis via inhibition of BCL-XL. cAMP elevating agents attenuate Doxorubicin induced-apoptosis. The aim of this study was to assess the effects of cAMP elevating agents via Forskolin and IBMX on phosphorylation of BAD in Pre-B acute lymphoblastic leukemia (pre-B ALL) cells. Materials and Methods: NALM-6 cells were incubated with cAMP increasing agents along with two concentrations of Doxorubicin 250 and 500 for 24 hours. Assessment of cell death was performed by Trypan blue staining and apoptosis was assessed by Annexin V via flowcytometry. Western blot was used for evaluating the expression of BAD protein and phosphorylation changes. Data was analyzed by Paired t-test. Results: The flowcytometry analysis of Annexin V revealed that cAMP increasing agents in combination with Doxorubicin lead to decreased rate of apoptosis in comparison to Doxorubicin alone. Analysis of western blotting showed that cAMP increasing agents cause phosphorylate serine residues of BAD. The study also indicated that Doxorubicin alone is unable to alter the phosphorylation status of BAD. Conclusion: Results of this study indicate that cAMP increasing agents attenuate doxorubicin-induced apoptosis via phosphorylation of BAD in NALM-6 cells. Keywords: cAMP, Acute lymphoblastic Leukemia, Doxorubicin, Forskolin, IBMX