تهيه واكسن كونژوگه پلي ريبوزيل ريبيتول فسفات هموفيلوس آنفلوانزاي تيپb با پروتيين Keyhole Limpet Hemocyanin و نانوذرهPoly lactic-co-glycolic acid و ارزيابي ايمني آن در مدل حيواني

Preparation of conjugate vaccine of Haemophilus influenzae type b polyribosylribitol phosphate with keyhole limpet hemocyanin protein and poly lactic-co-glycolic acid nanoparticle and its immunologica

چكيده زمينه و هدف: امروزه استفاده از نانومواد از پركاربردترين روش‌هاي ساخت داروهاي نوين است؛ اين مواد در افزايش قابليت دسترسي داروها به هدف بسيار مفيدند. هدف از اين مطالعه دستيابي به نانوواكسني ايمونوژن عليه مننژيت ناشي از باكتري هموفيلوس آنفلوانزا است. مواد و روش‌ها: در اين مطالعه تجربي، آنتي ژن كونژوگه‌اي از پلي ريبوزيل ريبيتول فسفات(PRP) هموفيلوس آنفلوانزا و يك مولكول ايمونوژن قوي به نامKeyhole Limpet Hemocyanin((KLH و نانو ذره‌اي با قابليت جذب سطحي بالا به نام Poly lactic-co-glycolic acid(PLGA) ساخته شد. جهت بررسي قدرت آنتي ژنيسيته، كونژوگه دو قسمتي و سه قسمتي حاصل به موش‌هاي آزمايشگاهي نر نژاد SW1 تزريق شد. بدين منظور موش‌ها به طور تصادفي به پنج گروه تقسيم شدند كه به ترتيب PRP، PRP+KLH، PRP-KLH، PRP-KLH-PLGA و PRP-TT را به همراه ادجوانت كامل فروند به صورت درون عضلاني دريافت كردند. در روز 28 بعد از تزريق، خون‌گيري انجام و نمونه‌هاي خوني از نظر افزايش تيتر آنتي بادي اختصاصي با تكنيك الايزا مورد مطالعه قرار گرفتند. جهت بررسي ميزان ورود به سلول آنتي ژن توليدي در سلول‌هاي ايمني از Immune Cell Uptake Assey و تكنيك فلوسايتومتري استفاده شد. يافته‌ها: نتايج نشان دادند تيتر آنتي بادي IgG در سرم حيوانات ايمن شده با واكسن‌هاي كونژوگه افزايش مي‌يابد. يافته‌ها هم‎چنين حاكي از افزايش ورود به سلول كونژوگه سه قسمتي حاوي نانو ذره در سلول‌هاي ايمني ميزبان است. نتيجه‌گيري: نتايج حاصل از اين مطالعه بيان‌گر اين واقعيت است كه آنتي ژن حاوي PLGA به مراتب قدرت جذب و ايمني‌زايي بيشتري داشته و مي‎تواند واكسن‌ قوي‌تري عليه مننژيت هموفيلوسي باشد. واژگان كليدي: آنتي ژن كونژوگه، هموفيلوس آنفلوانزا، مننژيت، واكسن

Abstract Background: Today, the use of nano-materials is one of the most common methods of making modern medications; these materials are very useful in increasing the accessibility of drugs to target. The aim of this study is to obtain immunogenic nano-vaccine against meningitis caused by Haemophilus influenza. Materials and Methods: In this experimental study, the PRP (polyribosylribitol phosphate) antigen of Haemophilus influenza was conjugated to keyhole limpet hemocyanin (KLH), a powerful immunogen molecule, and a nanoparticle with high adsorption called poly lactic co-glycolic acid (PLGA). The two-part and three-part conjugated antigens were injected into male SW1 race mice. The animals were randomly divided into five groups, which received PRP, PRP+KLH, PRP-KLH, PRP-KLH-PLGA, and PRP-TT intramuscularly together with complete Freund’s adjuvant, respectively. Twenty eight days after injection, blood samples were obtained and increases in serum antibody titer were determined with ELISA technique. For evaluation of the amount of the produced antigen cell entrance into immune cells, immune cells uptake assay and flow cytometry technique were used. Results: The results showed increases in serum IgG antibody titers of animals immunized with conjugate vaccines. The findings also suggest the higher phagocytosis of conjugated triplex-containing nanoparticle by host immune cells. Conclusion: The findings of this study indicate that antigen-containing PLGA has considerably higher absorption and immunogenicity and can be more powerful vaccines against Haemophilus meningitis. Keywords: Conjugate antigen, Haemophilus influenza, meningitis, vaccine