فسفات كلروكين تنها در عدم حضور گليسرول و يا DMSO، محركي پر قدرت براي ورود DNA به سلول‏هاي HEK293T است

Chloroquine Phosphate Is a Potent Inducer Only in Absence of Glycerol or DMSO to Enter DNChloroquine Phosphate Is a Potent Inducer Only in Absence of Glycerol or DMSO to Enter DNA into the HEK293T Cel

هدف: روش‏هاي متعددي براي وارد كردن مواد ژنتيكي خصوصا DNA به‏داخل سلول‏هاي حيوان به‏كار گرفته شده‏اند. روش وابسته به فسفات كلسيم روشي آسان و ارزان قيمت است با اين‏حال اين روش براي ترانسفكشن عده‏اي از سلول‏هاي حيواني كارايي مناسبي ندارد. در اين مطالعه تلاش بر اين بود كه بتوان كارايي ترانسفكشن با واسطه فسفات كلسيم را افزايش داد. مواد و روش‏ها: دويست هزار سلول HEK293T در هر يك از خانه‏هاي ظروف 6 خانه‏اي كه حاوي يك لامل پوشيده از پلي‏ال‏ليزين بود كاشته شده و تا رسيدن به تراكم 60 درصد در محيط مناسب رشد داده شدند. سلول‏ها سپس توسط يك روش استاندارد فسفات كلسيم در حضور يا عدم حضور فسفات كلروكين با پلاسميد رمز كننده پروتيين GFP (Green Fluorescence Protein) ترانسفكت شدند. سلول‏ها با ميكروسكوپ فلورسانس مورد مشاهده قرار گرفته و ميزان بيان GFP توسط نرم افزار Image J مورد اندازه‏گيري قرار گرفت. نتايج: ما نشان مي‏دهيم كه فسفات كلروكين مي‏تواند به‏ميزان قابل ملاحظه‏اي ترانسفكشن سلول‏هاي HEK293T را با واسطه فسفات كلسيم افزايش دهد به‏طوري‏كه در حضور اين ماده تعداد سلول‏هاي ترانسفكت شده تا 8 برابر افزايش مي‏يابد. فسفات كلروكين هيچ سميتي براي سلول‏ها نداشت ولي افزايش كارايي ترانسفكشن اين ماده در حضور گليسرول و يا DMSO (Dimethyl sulphoxide) مشاهده نگرديد. نتيجه گيري: ما فسفات كلروكين را به‏منظور افزايش كارايي ترانسفكشن توسط روش فسفات كلسيم توصيه مي‏كنيم. به‏علاوه پيشنهاد مي‏شود فسفات كلروكين به‏صورت تنها و در عدم حضور ساير محرك‏هاي ترانسفكشن مورد استفاده قرار گيرد.

Aim: Different methods have been used for introducing DNA into mammalian cells. Calcium phosphate-based transfection protocols are inexpensive and easy to perform, however, the transfection efficiency in some cases is not satisfactory. In this study we try to increase the efficiency of calcium phosphate-mediated cell transfection. Material and Methods: 2.0×105 HEK293T cells were plated in each well of a 6-well plate containing a 10% poly L lysine-coated coverslip and grown to 60% confluency. The cells were then transfected with a plasmid encoding GFP (Green Fluorescence Protein), using a standard calcium phosphate protocol in the presence or absence of chloroquine phosphate. GFP protein expression was observed by immunofluorescence microscopy and quantified with the help of Image J software. Results: We have shown that chloroquine phosphate can highly improve the efficiency of calcium phosphate-dependent transfection in the HEK293T cells, leading to an approximate 8-fold increase in the number of transfected cells. Chloroquine phosphate was not toxic to the cells, however, its positive effect on transfection efficiency was abolished in the presence of glycerol or DMSO (Dimethyl sulphoxide). Conclusion: we recommend chloroquine phosphate for increasing the efficiency of transfection by the inexpensive method of calcium phosphate. In addition, we recommend that chloroquine phosphate to be used alone and not along with other inducers of cell transfection. Keywords: Chloroquine phosphate, Transfection, HEK293T cells