ارزيابي چند شكلي ژن ميوستاتين در گوسفند نژاد فراهاني با استفاده از روش PCR-RFLP

Evaluation of Myostatin Gene Polymorphism in Farahani Sheep by PCR-RFLP Method

هدف: ژن ميوستاتين يا عامل 8 رشد و تمايز (GDF8) به‏عنوان عامل ايجاد كننده ماهيچه مضاعف شناخته شده است، كه در آن مجموعه‏اي از جهش‏هاي غيرفعال كننده ژن رخ مي‏دهند. در گاو، جهش‏هاي غيرفعال كننده در اين ژن منجر به توليد فنوتيپ ماهيچه مضاعف مي‏شود. هدف از انجام مطالعه حاضر تجزيه و تحليل ناحيه كدكننده در برگيرنده جهش‏هايي كه به‏طور بالقوه بيان ژن ميوستاتين را در گوسفند نژاد فراهاني تغيير مي‏دهند بود. مواد و روش‏ها: از 86 راس گوسفند فراهاني نمونه‏هاي خون گرفته شد و DNA استخراج شده به كمك كيت براي تكثير قطعه 337 جفت بازي ژن ميوستاتين استفاده شد. چند شكلي طول قطعات برشي محصولات PCR با افزودن آنزيم برشي HaeIII به محصولات واكنش PCR كامل اجرا شد. ژنوتيپ‏هاي PCR-RFLP آناليز شدند. نتايج: فراواني ژنوتيپ هاي Mm, MM و mm به ترتيب 046/0، 127/0 و 827/0 تشخيص داده شدند. فراواني آللي نيز براي آلل هاي M و m به‏ترتيب 11/0 و 89/0 برآورد گرديد. نتيجه گيري‏: مقايسه فراواني آلل M (آلل مطلوب) محاسبه شده در گوسفندهاي فراهاني با تحقيقات مشابه در نژادهاي مختلف دنيا نشان داد كه فراواني اين آلل در گوسفند فراهاني در سطح مناسبي نمي‏باشد. يعني آلل‏هاي ژن ميوستاتين در نژاد فراهاني در مقايسه با نژادهاي ديگر كمتر اصلاح و انتخاب شده اند. علاوه بر اين، مشخص گرديد كه تعادل هاردي ـ واينبرگ در جمعيت مورد مطالعه در رابطه با اين جايگاه برقرار نمي‏باشد.

Aim: Myostatin gene or growth and differentiation factor 8 (GDF8) which has been identified as the factor causing muscle doubling, undergoes a series of mutations that causes gene inactivation. In bovine the loss of gene activity has been associated with double- muscled phenotype.. Due to the role of myostatin gene in muscle development, the objective of this study was to analyze the coding region containing mutations which potentially altering the myostatin gene expression in Farahani sheep. Material and methods: DNA from blood samples of eighty six Farahani sheep was extracted and used to amplify a 337-bp fragment in myostatin gene. Restriction fragment length polymorphism (RFLP) of the PCR product was performed by addition of enzyme and then PCR-RFLP genotypes were analyzed. Result: Genotype frequencies of MM, Mm and mm were characterized as 0.046, 0.127 and 0.827, respectively. In addition the allelic frequencies for alleles M and m was estimated as 0.11 and 0.89 respectively. Conclusion: The results of this study indicated that the Farahani sheep was polymorphic for myostatin, but this population was not at Hardy- Weinberg equilibrium. Keywords: PCR-RFLP, Polymorphism, Myostatin gene, Farahani sheep