شناسايي برخي تقلبات زعفران (Crocus sativus L.) با استفاده از نشانگر مولكولي ITS

Effect of Plant Density and Corm Weight on Yield and Yield Components of Saffron (Crocus sativus L.) Under Soil, Hydroponic and Plastic Tunnel Cultivation

زعفران (L. Crocus sativus) يكي از گران ترين ادويه هاي دارويي جهان است كه توليد محدود و قيمت بالاي آن باعث شده تا در اين گياه تقلبات زيادي صورت بگيرد، اين تقلبات بيشتر شامل افزودن مواد گياهي و شيميايي مشابه زعفران مي باشد. براي تعيين اين تقلبات روش هاي مختلفي گسترش يافته است كه بيشتر آنها براساس مشخصات مورفولوژيكي، آناتومي و آزمون هاي شيميايي است. اين مطالعه نشان دهنده ي يك روش نوين براي تعيين تقلبات زعفران بر اساس روش هاي مولكولي وابسته به واكنش زنجيره اي پليمراز مي باشد كه در آن از نشان گر مولكولي ITS-2 (Internaltranscrribed spacer -2) استفاده شده است. در اين بررسي از يك آغازگر عمومي بر مبناي ناحيهS rDNA 8/5 و آغازگرهاي اختصاصي برگشتي بر مبناي ناحيه ITS-2 در گونه هاي مختلف تقلبات گياهي و غير گياهي نظير كلاله انار، ذرت، گلرنگ، زردچوبه، فلفل قرمز خرد شده و همچنين گوشت گاو و شتر براي انجام واكنش زنجيره اي پليمراز استفاده گرديد. بعد از انجام واكنش، نوار مربوط به توالي ITS-2 در چندين نمونه گياهي شامل ذرت، گلرنگ، انار، فلفل قرمز و زردچوبه‌ و همچنين گوشت گاو و شتر به عنوان تقلبات رايج زعفران، تكثير شدند. نتايج اين آزمايش نشان داد كه استفاده از تمامي آغازگرها در قالب واكنش PCR چندگانه سبب تكثير تمامي نوارهاي مربوط به انواع تقلبات مي شود. اگرچه اكثر نوارها در ژل آگارز 2 درصد مشاهده شدند و لكن استفاده از ژل پلي آكريل آميد20 درصد منجر به تفكيك بهتر نوارها بر روي ژل گرديد. اين روش كارايي لازم براي تشخيص تقلبات زعفران در سطح يك درصد وزني از مخلوط تقلبات را دارا مي باشد.

Saffron (Crocus sativus L.) is the most valuable food additive in the world which little production and high price of it caused some adulterations such as plant and chemical material similar to saffron. There are several methods for detecting these fraudulent based on morphological and chemical tests but they are not effective in some cases. In this research a novel molecular method based on ITS-2 marker is introduced. A common forward primer based on 5.8s rDNA for all plant frauds such as safflower, corn stigmas, pomegranate, turmeric and capsicum slices was designed then specific reverse primers based on ITS-2 for any frauds have been designed for polymerase chain reaction. Related ITS-2 bands were amplified in any adulterations in saffron. Specific primer for camel and cow meet fibers was designed based on cytochrome b gene and could amplified the related bands. Multiplex PCR with all of these primers could amplify all of the bands related to any adulterations. Furthermore, using 20% polyacrylamide gel lead to good segregation of bands. This method can be used successfully for detection of low percentage (1%) of fraudulent in saffron. So this marker can be used efficiently for detection of these frauds in commercial saffron