توليد ناحيه آنتي ژنيك vacA هليكوباكتر پيلوري در اشريشياكلي

Productnin of Antigenic region VacA Helicobacter pylori in E.coli

چكيده زمينه و هدف: هليكوباكترپيلوري شايع‎ترين باكتري است كه جوامع انساني را در بعد جهاني مبتلا به عفونت ساخته است. ژن vacA از مهم‎ترين شاخص‎هاي بيماري زايي اين باكتري مي‎باشد كه باعث تشكيل واكويل‎هاي اسيدي در سيتوپلاسم سلول و نيز تخريب سلول‎هاي اپيتليال مي‎شود. هدف از اين مطالعه بررسي خواص آنتي ژنيك پروتيين نوتركيب vacA هليكوباكترپيلوري در سرم انسان و موش آلوده مي‎باشد. مواد و روش‎ها: در اين مطالعه تجربي، قطعه حاوي ناحيه داراي بالاترين خاصيت آنتي ژنيك ژن vacA به طول bp1233 بر اساس برنامه‎هاي بيوانفورماتيكي به دست آمد، پس از تكثير ناحيه مورد نظر با استفاده از PCR، در ناقل پلاسميدي pET32a كلون و بيان شد. پس از خالص سازي پروتيين نوتركيب، آنتي ژنيسيته آن به روش وسترن بلات با سرم افراد آلوده به عفونت فعال هليكوباكترپيلوري و موش آلوده شده با پروتيين نوتركيب خالص شده بررسي شد. يافته‎ها: نتايج PCR و تعيين توالي نشان داد كه ژن هدف به درستي در ناقل مورد نظر كلون شده است. آنتي بادي‎هاي استفاده شده در وسترن بلات توليد و بيان پروتيين نوتركيب (65 كيلو دالتون) با غلظت 1/2 ميلي‎گرم در ميلي‎ليتر را نشان دادند. نتيجه‎گيري: تزريق پروتيين توليد شده به موش نشان داد كه اين پروتيين داراي خاصيت آنتي ژنيك و ايمونوژنيك مي‎باشد. بنابراين مي‎توان از آن به عنوان كانديد مناسبي براي طراحي كيت‎هاي تشخيصي و واكسن هليكوباكترپيلوري استفاده نمود. واژگان كليدي: ناحيه آنتي ژنيك، هليكوباكترپيلوري، پروتيين نوتركيب، ژن vacA

Abstract Background: Helicobacter pylori is the most common bacteria causing chronic infections worldwide. An important virulence factor of H. pylori is a vacuolating cytotoxin (VacA) that induces the formation of acidic vacuoles in cytoplasm and damage to epithelial cells. The aim of this study was to examine the antigenic properties of the recombinant VacA of H. pylori in infected sera of mice and human. Materials and Methods: In this experimental study, the highly antigenic region of VacA gene (1233 bp) was detected by bioinformatics methods, and it was amplified by PCR method and cloned into the pET32a expression vector. After expression and purification of the target protein, its antigenicity was studied by Western Blotting using human sera infected with H. pylori and sera from immunized mice infected with purified recombinant VacA. Results: PCR and sequencing results showed that the target gene was correctly cloned into the recombinant vector. Antibodies used in Western Blotting indicated the production and expression of the recombinant protein (65kDa) with concentration of 2.1 mg/ml. Conclusion: Recombinant VacA protein has antigenic and immunogenic properties; thus, it is a proper candidate for designing H. pylori vaccine and diagnostic kits. Keywords: Antigenic region, Helicobacter pylori, Recombinant protein, VacA gene