ايمني‏زايي ناحيه‏اي اسيدهاي آمينه 7601 تا 8140 از پروتيين Bap اسينتوباكتر بوماني

Immunogenicity of Amino Acid Region 7601-8140 in Biofilm Associated Protein of Acinetobacter baumannii

هدف: اسينتوباكتر بوماني يكي از پاتوژن‏هاي اصلي بيمارستاني است و ظرفيت بالايي براي مقاومت به انواع مواد ضد ميكروبي موجود دارد. اسينتوباكتر بوماني انواع متفاوتي از عفونت‏ها شامل پنوموني، مننژيت و عفونت‏هاي مرتبط با خون را ايجاد مي‏كند. پروتيين‏هاي مربوط به بيوفيلم (Bap) پروتييني اختصاصي در سطح سلول است كه مستقيماً در تشكيل بيوفيلم در اسينتوباكتر بوماني مورد نياز است و نقش اصلي را در عفونت‏زايي باكتري بازي مي‏كند. در مطالعه قبلي محققان حاضر نواحي متعددي از اين پروتيين بررسي شد و با در نظر گرفتن معيارهاي مختلف، چند ناحيه به عنوان نواحي حفاظت شده و ايمني‏زا معرفي و ايمني‏زايي يكي از اين نواحي مطالعه شد. اين ناحيه به اسيد‏هاي آمينه شماره 706- 1076 از پروتيين بالغ مربوط مي‏شود كه طي بيان اين ناحيه و تزريق آن به موش ميزان بالايي آنتي‏بادي توليد شد كه از موش در برابر اين باكتري محافظت مي‏كرد. در مطالعه پيش‏رو، ايمني‏زايي ناحيه معرفي شده ديگري (ناحيه 4) از پروتيين Bap بررسي مي‏شود تا ضمن تاييد مطالعات بيوانفورماتيكي قبلي ميزان ايمني‏زايي آن ارزيابي شود. مواد و روش‏ها: در مطالعه حاضر ژن ناحيه‏اي از پروتيينBap با 1620 جفت باز به وسيله واكنش زنجيره‏اي پليمراز تكثير و در pET32a كلون شد. اين ناحيه از پروتيين بزرگ Bap با موفقيت بيان و توسط آنتي‏بادي‏هاي مونوكلونال تاييد شد. در اين پژوهش موش‏هاي BALB/c به وسيله تزريق زيرپوستي پروتيين نوتركيب خالص، ايمن شده و ايجاد آنتي‏بادي در بدن موش با استفاده از الايزا ارزيابي شد. نتايج: تيتر آنتي‏بادي توليد شده در سرم موش بالا بود كه اين امر بيانگر آنتي‏ژنسيته و ايمني‏زايي بالاي اين پروتيين نوتركيب است. نتيجه‏گيري: نتايج نشان مي‏دهد كه اين پروتيين مي‏تواند گزينه مناسبي براي توليد يك واكسن جديد نوتركيب باشد.

Objective: Acinetobacter baumannii (A. baumannii) is a major hospital pathogen with a high capacity to resist most common anti-microbial agents. A. baumannii is the etiologic agent for various illnesses including pneumonia, meningitis, and bloodstream infections. Biofilm associated proteins (Bap) are specific cell surface proteins essential for the formation of biofilm and play a main role in its pathogenicity. Previously, we have studied various regions of this protein. Considering different criteria, some regions were introduced as conserved and immunogenic. The immunogenicity of one of those regions pertaining to amino acids 706-1076 previously examined has shown that its expression triggers high antibody levels when injected to mice thereby protecting the animals against the bacterium. The present study examines region 4 of the Bap protein in order to validate the previous bioinformatics studies and its immunogenicity. Methods: In order to obtain immunity against this pathogen, a 1620 bp gene from Bap was amplified and cloned in pET32a. This region from Bap was cloned, expressed and verified by monoclonal antibodies. BALB/c mice were immunized by subcutaneous injection of the pure recombinant protein. Mice immune response was determined by ELISA. Results: High titer of raised antibodies implied that the recombinant protein was a strong antigen and immunogen. Conclusion: The results indicate that this protein can be a suitable choice for developing a new recombinant vaccine against A. baumannii.