عنوان مقاله :
تاثير بيان پايدار IgG4 نوتركيب بر رشد سلولهاي Sp2.0
عنوان فرعي :
The Effects of Recombinant IgG4 Expression on the Growth of Sp2.0 Cell Lines
پديد آورندگان :
جهاندار، هدي نويسنده مركز تحقيقات بيوتكنولوژي، انستيتو پاستور ايران، تهران، ايران Jahandar, Hoda , خلج، وحيد نويسنده مركز تحقيقات بيوتكنولوژي، انستيتو پاستور ايران، تهران، ايران Khalaj, Vahid , نعمتالهي، ليلا نويسنده مركز تحقيقات بيوتكنولوژي، انستيتو پاستور ايران، تهران، ايران Nematollahi, Leila , زندي، فاطمه نويسنده مركز تحقيقات بيوتكنولوژي، انستيتو پاستور ايران، تهران، ايران Zandi, Fatemeh , عنايتي، سميه نويسنده مركز تحقيقات بيوتكنولوژي، انستيتو پاستور ايران، تهران، ايران Enayati, Somayeh , وزيري، بهروز نويسنده مركز تحقيقات بيوتكنولوژي، انستيتو پاستور ايران، تهران، ايران Vaziri, Behrouz
اطلاعات موجودي :
فصلنامه سال 1392 شماره 0
كليدواژه :
حداكثر چگالي سلولي , IgG4 , Maximum cell density , monoclonal antibody , Sp2.0 cell line , آنتيبادي تك دودماني , سلول Sp2.0
چكيده فارسي :
هدف: مطالعه تغييرات فيزيولوژيك سلولهاي نوتركيب در مقايسه با سلولهاي والد، اطلاعات مفيدي براي بهبود كارآيي فرايند توليد فراهم مينمايد. در اين مطالعه تاثير بيان IgG4 كايمريك عليه نشانگر CD33 بر رشد سلول Sp2.0 بررسي شده است.
مواد و روشها: ژنهاي نواحي متغير زنجيرههاي سبك و سنگين آنتيبادي توليد شده توسط سلول M195 به ترتيب در ناقلهاي pFUSE-CLIg-hk و pFUSE-CHIg-hG4 همسانهسازي شد. پلاسميدهاي نوتركيب در دو مرحله با استفاده از ليپوفكتامين به سلولهاي Sp2.0 منتقل شد. سلولهاي پايدار در محيط حاوي آنتيبيوتيكهاي بلاستيسيدين و زيوسين انتخاب شدند. الحاق سازه نوتركيب به ژنوم سلولهاي تراريخت مقاوم به آنتيبيوتيكها و همچنين بيان IgG4 با استفاده از روشهاي PCR، RT-PCR و وسترن بلات بررسي شد. براي مطالعه پارامترهاي كينتيكي، سلولهاي والد و نوتركيب با چگالي 105×1 سلول در هر ميليليتر محيط كشت در پليت 12 خانه به مدت 9 روز انكوبه شدند و هر 24 ساعت از سلولها نمونهبرداري شد و شمارش تعداد سلول زنده و محاسبه درصد زنده بودن انجام گرفت.
نتايج: بر اساس نتايج PCR، RT-PCR و وسترن بلات، ايجاد سلول توليد كننده پايدار IgG4 تاييد شد. اين مطالعه نشان داد كه حداكثر چگالي سلولي براي سلولهاي نوتركيب در مقايسه با سلولهاي والد 46 درصد كاهش يافته است در حالي كه در اين نمونهها درصد سلولهاي زنده تغييري نكرده است.
نتيجهگيري: بر اساس نتايج اين تحقيق بيان IgG4 كايمريك در سيستم Sp2.0/pFUSE-CHIg-hG4-pFUSE-CLIg-hk باعث تغيير برخي از پارامترهاي رشدي سلول ميزبان ميشود.
چكيده لاتين :
Objective: The study of physiological changes in recombinant cell lines provides useful information to improve production performance. In this study, we investigate the effects of an anti-CD33 chimeric IgG4 expression on Sp2.0 cell growth.
Methods: Variable region genes of light and heavy chains of monoclonal antibody produced by M195 were cloned in pFUSE-CLIg-hk and pFUSE-CHIg-hG4 expression vectors, respectively. Transfection of recombinant plasmids into Sp2.0 cell lines was performed using lipofectamine in two steps. Positive transformant cells were isolated and subjected to PCR, RT-PCR and Western blot analysis to confirm the integration of gene cassettes and the expression of recombinant IgG4.
To assess the growth parameters, recombinant and parent Sp2.0 cell lines were seeded at a density of 1×105 cells/ml in duplicate into 12-well plates. For nine days, culture plates were sampled daily and viable cell count and viability determined.
Results: The results of PCR, RT-PCR and Western blot analyses confirmed the generation of stable producer cell lines. In recombinant cells, the maximum cell density decreased by 46%. However, it was observed that IgG4 expression had no effect on cell viability of these transfectants.
Conclusion: Our results showed that the expression of recombinant IgG4 can change growth parameters in Sp2.0 cell lines that express the pFUSE-CHIg-hG4-pFUSE-CLIg-hk construct.
عنوان نشريه :
پژوهش هاي آسيب شناسي زيستي
عنوان نشريه :
پژوهش هاي آسيب شناسي زيستي
اطلاعات موجودي :
فصلنامه با شماره پیاپی 0 سال 1392
كلمات كليدي :
#تست#آزمون###امتحان
