بررسي اثر مدت زمان انجماد بر زنده ماندن و كليواژ جنين هاي دو سلولي موش

The effect of freezing period on the viability and cleavage of two-cell embryos in mice

سابقه و هدف: گزارشاتي مبني بر تاثير منفي انجماد شيشه اي بر بقا و كليواژ جنين ها وجود دارد. هدف از اين مطالعه، تاثير مدت زمان انجماد جنين هاي دو سلولي موش بر زنده ماندن و كليواژ آن ها بعد از ذوب مي باشد. مواد و روش ها: در اين مطالعه تجربي، بعد از تحريك تخمك گذاري موش هاي ماده NMRI، جفت شدن با موش هاي نر و تاييد وجود پلاك واژني، موش هاي ماده 48-44 ساعت بعد از تزريق HCG، قطع نخاع شدند. جنين هاي دو سلولي حاصله به روش فلاشينگ جمع آوري شده و به مدت 24 ساعت در انكوباتور C?37 با جريان CO2 نگهداري شدند. جنين ها در 6 گروه شامل گروه شاهد، انجماد به مدت 24 ساعت، 72 ساعت، يك هفته، دو هفته و يك ماه تقسيم شدند. بعد از اتمام زمان انجماد، جنين ها به روش استاندارد ذوب شده و زنده ماندن و تقسيم سلولي آن ها مورد بررسي قرار گرفت. نتايج: درصد جنين هاي زنده بعد از مدت زمان انجماد نه تنها نسبت به گروه شاهد اختلاف معني داري را نشان داد، بلكه اختلاف بين گروه ها هم مشهود بود (05/0P < ). تكامل جنين ها بعد از انجماد در مدت زمان هاي مختلف نسبت به گروه شاهد (0001/0P < ) و در مقايسه هاي بين گروهي (05/0P < ) افت چشم گيري را نشان دادند. نتيجه گيري: طول مدت نگهداري جنين هاي دو سلولي منجمد شده موش، تاثير منفي بر بقا و تقسيم سلولي آن ها دارد. به نظر مي رسد كه انجام انجماد جنين هاي موش در مرحله دو سلولي قابليت تكامل به مراحل بالاتر را كاهش مي دهد. بهترين زمان جهت انتقال به رحم موش ماده، 8 سلولي مي باشد تا فرصت ادامه تكامل در سيستم توليد مثل انجام پذيرد.

Background: Despite the advantages of the vitrified embryos, some negative aspects of the survival and cleavage of such embryos are reported. This study aimed to examine the effect of freezing period on the viability and cleavage of two-cell mouse embryos. Materials and Methods: In this experimental study, following the induction of ovulation in female NMRI mice, mating and confirming the presence of vaginal plug, female mice were sacrificed by cervical dislocation, 48-44 h after hCG injection. The two-cell embryos were collected by flushing and incubated for 24 h in an incubator with CO2 stream, 37?C. Embryos were divided into the 6 groups: the control group, freezing for 24 hours, 72 hours, one week, two weeks and one month. After the completion of the freezing periods, the embryos were thawed by the standard methods and their viability and cell division were examined. Results: Not only the percentage of embryos survived after freezing period showed a significant difference compared to the control group, but there were also significant differences between the experimental groups (P < 0.05). Embryo development after different freezing periods showed a significant decline compared to the control group (P < 0.0001) and also between the experimental groups (P < 0.05). Conclusion: The freezing period for two-cell mouse embryos has negative effects on the embryo survival and cell division. It seems that freezing in two-cell stage embryos can reduce the ability to evolve to the higher stages. The best time to transfer to the frozen embryos to the uterus of female mice would be in 8-cell stage to provide the opportunity to continue the development of the reproductive system.