مقايسه چهار كيت استخراج RNA تجاري به منظور تشخيص ويروس ويرمي بهاره كپور معمولي

Comparison of four RNA isolating methods for identification of spring viraemia of carp virus (SVCV)

ويرمي بهاره كپور (SVC)، توسط ويروسي باRNA تك رشته اي منفي از خانواده رابدوويريده ايجاد مي شود. ويروس SVCV عامل اصلي بيماري مسري ويرمي بهاره كپور در سرتاسر جهان بخصوص در ماهي كپور معمولي پراكنده است و در ديگر خانواده هاي ماهيان شامل اردك ماهيان ، كپور ماهيان دندانه دار ، خورشيد ماهيان ، گربه ماهيان و آزاد ماهيان نيز سبب بيماري مي گردد. در اين مطالعه به منظور دستيابي به روشي مناسب براي استخراج RNA ويروسSVCV ، كارايي چهار كيت مختلف براي استخراج RNA از سويه 70/56 SVCV تكثير يافته در كشت سلولي، مورد مقايسه قرار گرفتند. دو كيت بر اساس استفاده از روش ماده گوانيدين تيوسانات و فنل – كلروفرم (RNA Extraction IQ2000 ساخت تايوان و RNX-PLUS ساخت سيناژن، ايران) و دو كيت بر اساس روش ستوني ( تجاري Cinnapure (ساخت سيناژن، ايران) وHigh Pure RNA Isolation Kit (Roche، آلمان) جهت جداسازي RNA مورد استفاده قرار گرفتند. نتايج نشان داد كه ميزان غلظت RNA استخراج شده با كيت هاي Roche و Cinapure ( به ترتيب 76/31 و 21/16 ميكروگرم بر ميكروليتر ) بيشتر از دو روش فنل – كلروفرم بوده است . همچنين بجز كيت IQ2000 kit ديگر كيت ها در RT-PCR باند bp480 بر روي ژل الكتروفورز را نشان دادند . همچنينRNA استخراج شده در روش كيت تجاريIQ2000 kit داراي غلظت كمتري بود . در نهايت در اين تحقيق استخراجRNA با روش ستوني به مراتب از نظر خلوص و غلظت بهتر از روش هاي فنل – كلروفرم مشاهده گرديد.