بررسي خصوصيات فيزيولوژيكي و شناسايي مولكولي نمونه هاي ساپرولگنياي جداسازي شده از تخم ماهيان قزل آلاي رنگين كمان (Oncorhynchus mykiss) وماهي آزاد درياي خزر(Salmo trutta caspius) به روش RAPD – PCR

Evaluation of physiological aspects and molecular identification of Saprolegnia isolates from rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) and Caspian trout (Salmo trutta caspius) eggs based on

جنس ساپرولگنيا يكي از مهمترين قارچهاي آبزي بيماريزا در ماهيان پرورشي و وحشي است. در اين مطالعه از تخمهاي ماهيان قزل آلاي رنگين كمان و آزاد درياي خزر آلوده به قارچ در مركز بازسازي ذخاير آزاد ماهيان (شهيد باهنر كلاردشت) نمونه برداري گرديد. پس از كشت و خالص سازي،16 جدايه ساپرولگنيا (8 نمونه از تخم ماهي قزل آلاي رنگين كمان كه بصورت R2 تا R9 و 8 نمونه از تخم ماهي آزاد درياي خزر كه بصورت S2 تا S9 كد گذاري شدند) بدست آمد. در آزمايشات مولكولي جهت مقايسه نمونه هاي ساپرولگنياهاي اخذ شده از دو نمونه DNA تاييدشده شامل ساپرولگنيا پارازيتيكا (Saprolegnia parasitica) (ACTT # 200048) با كد R1 و ساپرولگنيا ديكلينا Saprolegnia diclina)( ACTT # 4206) ( با كد S1 در آزمايشات RAPD – PCR استفاده گرديد. براساس ضريب تشابه بدست آمده، نمونه ها به سه گروه تقسيم شدند و ضريب شباهت در بين اعضا هر گروه بيش از 90% بود. بر اساس ضريب شباهت، نمونه هاي هم گروه نمونه رفرانس،گونه مشابه در نظر گرفته شد. بطوريكه اعضا گروه 1 ساپرولگنيا پارازيتيكا، اعضا گروه 3 ساپرولگنيا ديكلينا و اعضا گروه 2 شناسايي نگرديد. تمام نمونه ها در دماي 12 درجه سانتيگراد رشد داشتند ليكن در دماي 18 درجه رشدشان بسيار كندي بود. همچنين در بين نمونه ها اختلاف سرعت رشد نيز وجود داشت كه كمترين سرعت رشد مربوط به S8 و R2 بود. در ارزيابي ميكروسكوپيك 78% از نمونه هاي ساپرولگنياي تخم ماهي قزل آلا و 5/55% ساپرولگنياي تخم ماهي آزاد قابليت توليد گامه متوالي داشتند. از سوي ديگر پديده توليد نسلهاي متوالي زيواسپور ثانويه در تمام اعضا گروه 1 مشاهده شد. ليكن اين پديده در دو گروه ديگر مشاهده نگرديد. اين مطالعه نشان ميدهد كه بهترين روش شناسايي براي گونه هاي ساپرولگنيا روشهاي مولكولي است و بايد به عنوان يك روش مكمل تاييد كننده در كنار ساير روشهاي شناسايي مبتني بر خصوصيات مورفولوژيكي و فيزيولوژيكي اين گروه از قارچها مورد استفاده قرار گيرد.

The genus of saprolegnia is one of the most important pathogenic aquatic fungi in farmed and wild fish. In the present study, fungal infected egss were collected from rainbow trout (Oncorhyncus mykiss) and Caspian trout (Salmo trutta caspius). After purification, 16 isolates were obtained (8 isolates from rainbow trout and 8 isolates from Caspian salmon, respectively). The isolates were then coded as R2 – R9 (rainbow trout) and S2 – S9 (Caspian trout).The registered DNA for S. parasitica (ACTT # 200048) and S. diclina (ACTT # 4206) were used and coded as R1 and S1, respectively. Based on the RAPD profile obtained all samples were divided to 3 groups and members of each group had more than 90% similarity among themselves. According to matrix of similarity and reference strains, the isolates were classified as three groups. Therefore, all of isolates in group 1 and 3 were S. parasitica and S. diclina, respectively, and the members of group 2 were known as Saprolegnia sp. The results of thermal resistance assessment showed that the isolates of rainbow trout and Caspian salmon eggs had slow growth in the temperature between 18 – 20 °C. Thus, R2 and S8 isolates had the lowest radial growth compared to other isolates. The isolates categorized in S. parasitica (group 1) created secoundry zoospores but not observed in two other groups. Thus, catenulated gamme was found in 78% and 55.55% isolates of rainbow trout and Caspian trout eggs, respectively. This study indicated that molecular methods were the best methods for identification of Saprolegnia spp. and it could be applied as a supplementary confirming method.