جداسازي سلول‌هاي بنيادي مزانشيمال بافت اندومتريال و بررسي بيان ماركرهاي اختصاصي سلول‌هاي بنيادي در قياس با سلول‌هاي بنيادي مزانشيمي مغز استخوان

mesenchymal stem cellsIsolation and characterization of endometrial mesenchymal stem cells and the evaluation of surface markers in comparison to bone marrow

چكيده سابقه و هدف سلول‌هاي بنيادي انساني در بالغين، فاقد خصوصيات اختصاصي بافت هستند و در سلول درماني و مهندسي بافت از جايگاه ويژه‌اي برخوردار مي‌باشند. در تحقيق حاضر، سلول‌هاي بنيادي از بافت اندومتر تخليص و به منظور تعيين ماهيت با سلول‌هاي بنيادي مزانشيمي مغز استخوان مورد مقايسه قرار گرفت. مواد و روش‌ها در يك مطالعه تجربي 5 نمونه بافت اندومتر و آسپيره خون مغز استخوان از اهداكنندگان سالم، با كسب رضايت آگاهانه توسط متخصصين مربوطه گرفته شد. پس از جداسازي و گذشت سه پاساژ، براي ماركرهاي سطحي ويژه سلول بنيادي، CD45 ، CD34 ، CD146 ، CD105 ، CD73 ، CD133 و CD90 با استفاده از روش فلوسيتومتري مورد مقايسه قرار گرفتند. آناليز كاريوتايپ نيز براي سلول‌هاي بنيادي اندومتر انجام پذيرفت. يافته‌ها در آناليز فلوسيتومتري سلول‌هاي چسبنده، ميزان بيان مثبت ماركرهاي بنيادي سطحي: 9/0% :CD34 ، 8/95% CD90: ، 3/98% CD105: ، 4/1% CD133 ، 84% CD44: ، 96% CD73: ، 1/1% CD45: و 3/59% CD146: را شامل مي‌شدند و اين در حالي بود كه در سلول‌هاي بنيادي مزانشيمال خون مغز استخوان، ميزان بيان ماركرهاي 3/0% CD45: ، 13% CD146: ، 3/89% CD44: ، 9/97% CD73: ، 5/0% CD34: ، 4/98% CD90: ، 6/98% CD105: و 6/0% CD133: بود. مورفولوژي سلول‌هاي اندومتريال، شبيه سلول‌هاي مزانشيمي و به حالت دوكي فرم بوده و داراي كاريوتايپ 46XX طبيعي بودند. نتيجه گيري سلول‌هاي بنيادي جداسازي شده از بافت اندومتريال، داراي جمعيت ناهمگوني از سلول‌ها بوده و سلول‌هاي بنيادي جداسازي شده داراي سطوح بالايي از بيان ماركر سطحي ويژه سلول‌هاي بنيادي، خصوصاً منشا مزودرم مي‌باشند.

Abstract Background and Objectives Stem cells are undifferentiated cells able to self-renew as well as to produce more differentiated daughter cells. In this study, stem cells were isolated from the endometrium and were then compared with the mesenchymal stem cells for their nature to be determined. Materials and Methods Endometrial samples from healthy donors with informed consent after laparoscopy were collected by a gynecologist. The bone marrow samples were aspirated from femur by a hematologist. At least 5 mL of blood was removed and the tissue is at least one square centimeter. After three successive passages, the stem cell surface markers of CD90, CD105, CD146, CD34, CD73, CD44, CD133, and CD45 were analyzed using flowcytometry. The karyotype analysis was also performed for the adherent cells. Results Endometrial stem cells were successfully isolated from the five samples. Adherent cells in flowcytometric analysis showed the positive expression of surface markers to be CD146: 59.3% , CD105: 98.3%, CD90: 95.8%, CD34: 0.9%, CD 45: 1.1%, CD73: 96%, CD44: 84%, and CD133: 1.4% while in bone marrow mesenchymal stem cells the expression of markers were CD105: 98.6%, CD90: 98.4%, CD34: 0.5%, CD73: 97.9%, CD44: 89.3%, CD146:13%, CD45: 0.3%, and CD133: 0.6%. The morphology of endometrial cells, spindle-like mesenchymal cells, the mode of application, and 44XX karyotype were normal. Conclusions Stem cells isolated from the endometrial tissue had a heterogeneous population of the cells and high levels of expression of specific surface markers of stem cells especially the mesoderm lineage. Key words: Endometrium, Adult Stem Cells, Flow Cytometry