كلونينگ ژن آلفا آميلاز در وكتور انتقالي pGFK114.1 اشرشياكولي- باكتروئيدي و انجام كانژوگاسيون بين سويه هاي مختلفE.coli جهت امكان استفاده از آن در محيط گوارشي نشخواركنندگان

Cloning of amylase gene in E.coli-Bacteroides pGFK114.1 shuttle vector and conjugation between Ecoli strains for possible application in rumen digestive system.

به منظور افزایش كارآیی تولید در صنعت دامپرروری می توان از تكنولوژی DNA نوتركیب بهره بردكه پیشرفت های اخیر در سیستم انتقال ژن، تغییرات ژنتیكی باكتری های شكمبه ای را با توانایی تولید آنزیم های هیدرولیز كننده ممكن ساخته است. این تكنولوژی می تواند ضمن كاهش معایب افزودنی های آنزیمی افزایش بازدهی مواد مغذی در شكمبه را به دنبال داشته باشد. از آنجاییكه فرایند ترانسفورماسیون باكتری های سیستم گوارشی دارای بازدهی پایینی می باشد كانژوگاسیون می تواند یكی از روش های موثر انتقال ژن در شكمبه باشد. در بیشتر تحقیقات صورت گرفته از باكتری اشرشیا كولی بهره می گیرند كه یك باكتری بی هوازی اختیاری است و می تواند در شرایط بی هوازی شكمبه رشد نماید. در این تحقیق ژن آلفا آمیلاز كه پیش از این در وكتور pET28a كلون شده بود با تكثیر در واكنش زنجیره ای پلیمراز در وكتور انتقالی pGFK114.1 ساب كلون شد و درون سویه ای از باكتری DH5α E.coli ترانسفورم گردید. سپس با الگو گرفتن از محیط سیستم گوارش جهت انتقال ژن، عمل كانژوگاسیون بین سویه دیگری از باكتری اشرشیاكولی با كمك وكتور انتقالی pRK231 كه در سویه TG1 E.coli ترانسفورم شده بود، صورت گرفت. به این ترتیب باكتری اشرشیا كولی حاوی وكتور انتقال یافته از طریق كانژوگاسیون بیانگر انتقال موفق مواد ژنتیكی توسط این روش می باشد كه در محیط شكمبه هم طبق گزارشات موجود به راحتی قابل انجام می باشد.

To increasing the efficiency of production in livestock industry could use recombinant DNA technology . Recently progress in gene transfer system, genetic modifying of ruminal bacteria with ability of hydrolytic enzyme production has been possible. Resulting this technology reduce of disadvantages of enzyme supplements as well as increase of nutrient flow in rumen. Since transformation in rumen bacteria has low efficiency therefore conjugation could be effective for moving genetic elements. In more previous studies E.coli as a facultative anaerobe bacteria has used because could grow in rumen. The present study , an amylase gene previously clone in pET28a and amplified by polymerase chain reaction then subcloned in shuttle vector pGFK114.1 following transformed in E.coli DH5α. Conjugation was performed between two E.coli DH5α and TG1 donors containing pGFK114.1 and pRK231 helper plasmid respectively and one recipient E.coliBL21 DE3 using pattern of digestive system. We have successfully transformed cloned amylase gene to recipient bacteria such rumen environment as reported before.