جداسازي متابوليت هاي ثانويه طي فرآيند استخراج DNA از گياه آويشن و آناليز آنها با روش GC-Mass

Separation of secondary metabolites in DNA extraction process of Thymus and analysis of them by GC mass

استخراج DNA ژنومي با كيفيت و كميت مطلوب از نيازهاي بنيادي فنهاي مولكولي زيستي مختلف است. در بعضي تحقيقات به دلايل مختلفي نمونه هاي گياهي مورد مطالعه از طبيعت جمع آوري مي شود كه اين گياهان معمولاً خشبي بوده و استخراج DNA از بافت گياهي اين نمونه ها به علت وجود كربوهيدرات ها، تركيبات پلي فنلي و پروتيينها با مشكلاتي روبرو است. به ويژه آنكه اين تركيبات به شكل كمپلكس با اسيدهاي نوكلييك تركيب مي شوند و جداسازي آنها را با مشكل مواجه مي كند. در اين تحقيق DNA ژنومي از برگ گياه آويشن به گل رفته با چهار روش Doyle and Doyle، Dellaporta،Kang and Yang و Khanuja استخراج گرديد. نتايج به دست آمده نشان داد كه روش خانوجا با اندكي تغييرات از بقيه روشها بهتر بود. در اين روش استخراج، رسوب چسبناك قهوه اي رنگي در محلول حاوي DNA به دست آمد كه در روشهاي ديگر ديده نشد. بر اين اساس اين رسوب توسط آناليزهاي GC-Mass، IR و طيف UV مورد تجزيه و تحليل قرار گرفت و مشخص شد كه اين رسوب شامل تيمول، كارواكرول، نروليدول و بورنيول بود. در طيف GC بيشترين ميزان را ماده تيمول دارا بود (65 درصد). از اين رو روش خانوجا بهينه شده توانست متابوليت هاي ثانويه عمده آويشن را جداسازي كرده و مي توان پيشنهاد نمود كه اين روش جهت استخراج DNA گياهاني كه به گل رفته اند مناسب تر از ساير روشها مي باشد.

One of the basic needs of different techniques in molecule biology is the production of genomic DNA with desired quality and quantity. In some researches the plant samples are collected from nature and these plant tissues are usually adult and due to presence of carbohydrate, polyphenols complex and proteins in their components, we cannot extract DNA with high quality and quantity. In other hand, these complexes are bond with nucleic acids and separation of them from acid nucleic is difficult. In this study, genomic DAN extraction from the leaf of adult Thymus plant was carried out by Doyle and Doyle, Dellaporta, Kang and Yang and Khanuja methods. The results showed that Khanuja method with some modifications is better than others. In this extraction method, brown-sticky sediment was separated from DNA. Analysis by GC-Mass, IR and UV revealed that this sediment contain Thymol, Carvacrol, Nerolidol and Borneol. Thymol substance has the greatest amount in GC (%65). So, the improved Khanuja method can separate the main secondary metabolites of Thymus and this method could be advised for DNA extraction from adult and mature plant.