تعيين گونه هاي بروسلا ايزوله شده از نمونه‌هاي خون بيماران مشكوك به بروسلوزيس با روش PCR

Determination of isolated Brucella species in blood samples of patients with brucellosis by PCR

چكيده زمينه و هدف: بروسلوزيس به عنوان يكي از بيماي‌هاي شايع زيونوز محسوب مي‌شود و استان همدان يكي از مناطق اندميك اين بيماري است. هدف از اين مطالعه جداسازي بروسلا از بيماران بروسلوزيس و تعيين گونه‌هاي اين باكتري به منظور بررسي شيوع اين سويه‌ها بود. مواد و روش‌ها: اين مطالعه از نوع مقطعي- توصيفي بود و از50 بيمارمشكوك به بروسلوز و داراي علايم باليني نمونه‌گيري از خون انجام شد. هر نمونه در محيط كشت خون BACTEC به مدت 14 روزتحت بررسي قرار گرفت. سپس، نمونه‌ها روي محيط بروسلا آگار كشت داده شد و براي تشخيص باكتري‌هاي رشد كرده، از آزمون‌هاي بيوشيميايي استفاده گرديد. در مرحله بعد آزمون PCR جهت تاييد و تعيين گونه‌هاي بروسلا انجام شد. يافته‌ها: از 50 نمونه خون گرفته شده از بيماران مشكوك به بروسلوز، 7 نمونه خون از نظر آلودگي با بروسلا با روش كشت مثبت و با روشPCR تاييد گرديد. توسط PCR مستقيم روي نمونه‌هاي خون (22 درصد) 11 مورد مثبت شدند كه تمام موارد كشت مثبت توسط PCR نيز شناسايي شدند. پس از انجام آزمون‌هاي بيوشيميايي و PCR ، بروسلا ملي تنسيس به عنوان گونه باكتري‌هاي جدا شده، شناخته شد. نتيجه‌گيري: در اين مطالعه تكنيك PCR براي تشخيص گونه‌هاي بروسلا در مقايسه با روش‌هاي معمول باكتري شناسي مورد ارزيابي قرار گرفت. اين مطالعه نشان مي‌دهد كه شيوع بروسلوز با عامل غالبيت بروسلا ملي تنسيس در استان همدان مشهود بوده و تلاش براي ريشه كن سازي اين باكتري در اين منطقه بايستي انجام گيرد. واژگان كليدي: بروسلوزيس، شناسايي،كشت خون، PCR

Abstract Background: Brucellosis is a major cause of zoonosis disease and is endemic in hamadan Province in Iran. The purpose of this study was to isolate Brucella species from brucellosis patients and identify different species of this bacterium in order to determine the prevalence of the species. Materials and Methods: This study was descriptive- cross sectional and fifty blood samples were obtained from brucellosis patients with clinical symptoms. The samples were cultured in BACTEC system and incubated for 14 days. Then, the samples were cultured on Brucella agar and biochemical tests were done for identification of bacteria. Finally, Polymerase Chain Reaction (PCR) applied for confirmation and isolated identification with specific primers. Results: Seven Brucella strains were isolated from 50 blood samples of the patients with brucellosis by blood culture and PCR. The PCR results on blood specimens showed 4 positive in spite of the negative results of blood culture. PCR and biochemical methods revealed that all the 11 isolated bacteria were Brucella Melitensis. Conclusion: This study was designed to evaluate PCR technique as a diagnostic tool for brucella spp in comparison to conventional techniques. This study showed a high prevalence of brucellosis due to Brucella Melitensis in Hamadan Province and efforts in this region should be aimed at the eradication of this bacterium. Keywords: Brucellosis, Blood culture, Diagnosis, PCR.