بررسي اثر غلظتهاي متفاوت ملاتونين برروي ميزان تولدهاي زنده حاصل از انتقال جنين هاي دو سلولي موش سوري نژاد NMRI

Effect of Different Concentrations of Melatonin on Live Births Resulting from the Transfer of Two-Cell Embryos of NMRI Mice

زمينه و هدف : ناباروري معضلي جهاني است و ميليون ها مرد و زن را در كشورهاي توسعه يافته و در حال توسعه تحت تاثير قرار داده است . در اين راستا لقاح آزمايشگاهي ( In-vitro fertilization (IVF) ) نقش حياتي بازي مي كند. مطالعات انجام شده در لقاح آزمايشگاهي نشان داده است كه فقدان لانه گزيني دليل اصلي نتايج ناموفق لقاح آزمايشگاهي مي باشد. ملاتونين مي تواند ميزان زنده ماندن جنين و ميزان موفقيت لقاح آزمايشگاهي را افزايش دهد و اين كار را با حذف راديكال هاي آزاد و از بين بردن گونه هاي فعال اكسيژن ( oxygen reactive species (ROS) ) انجام مي دهد. اين مطالعه به منظور بررسي اثر غلظت هاي متفاوت ملاتونين برروي ميزان نوزادان زنده متولد شده حاصل از انتقال جنين هاي دوسلولي موش سوري طراحي شد. روش كار: در اين مطالعه، با تزريق 5/7 واحد هورمون گنادوتروپين سرم اسب باردار ( pregnant mares serum gonadotropin) (PMSG) ) و سپس همين ميزان هورمون گنادوتروپين جفتي انساني ( human chorionic gonadotropin) (hCG) ) 48 ساعت بعد بصورت داخل صفاقي، تخمك گذاري در موش هاي ماده ي 8-6 هفته اي نژاد NMRI تحريك شد . 48 ساعت بعد از آن جنين هاي دوسلولي از لوله هاي رحمي موش هاي ماده بدست آمد. جنين هاي دوسلولي به موش هاي سوري حامله ي كاذب از نژاد مشابه از طريق جراحي و به صورت دوطرفه انتقال داده شدند. به هر لوله 14-8 جنين انتقال داده شد. مطالعه شامل 4 گروه آزمايش و يك گروه كنترل (6 موش در هر گروه ) مي باشد. گروه هاي آزمايش با تزريق زيرجلدي ملاتونين با غلظت هاي 100 ميكرومولار، 10 ميكرومولار، 1 ميكرومولار و 100 نانومولار تيمار شدند. بعد از سزارين در روز 18 بارداري، درصد تولدهاي زنده مشخص شدند. نتايج با استفاده از آزمون آماري مجذور كاي ( chi-square test ) ارزيابي شد و تجزيه و تحليل آماري با استفاده از نرم افزار ver 16/0 SPSS انجام گرفت . درصد تولدهاي زنده محاسبه و با گروه كنترل مقايسه شد . يافته ها : 701 جنين دوسلولي به يك گروه كنترل و 4 گروه آزمايش موش سوري انتقال داده شدند. نتايج نشان داد كه تعداد و درصد نوزادان متولد شده در غلظت هاي 100 ميكرومولار، 10 ميكرومولار ملاتونين و گروه كنترل به ترتيب 21 (55/15%)، 13 (15/9%) و 9 (47/6%) بود و در غلظت هاي 1 ميكرومولار و 100 نانومولار، هيچ نوزاد زنده اي متولد نشد. بيشترين ميزان تولد زنده در غلظت 100 ميكرومولار بدست آمد و تفاوت معني داري با گروه كنترل نشان داد ( p?0.0001 ) . ميزان تولدهاي زنده در غلظت 10 ميكرومولار و گروه كنترل تفاوت معناداري را نشان ندادند. نتيجه گيري: نتايج اين مطالعه نشان مي دهد كه تزريق زير جلدي ملاتونين روند رشد جنين دو سلولي موش و تكامل پس از جايگزيني موش سوري را بهبود مي بخشد.

Background & objectives : Infertility is a global problem affecting millions of men and women in developed and developing countries. In this regard, in-vitro fertilization (IVF) plays an important role in improving the quality of life in infertile patients. However, studies have shown that the implantation failure in IVF is the main challenge of this procedure. Melatonin can increase the survival rate of embryos and IVF success rate through eliminating free radicals and removing reactive oxygen species. So, this study is conducted to investigate the effects of different concentrations of melatonin on the rate of newborns of mice following transfer oftwo-cell embryos . Methods : In this study, female mice with average age of six to eight weeks were superovulated by administering pregnant mares serum gonadotropin (PMSG) intraperitoneally (7.5 IU. ip), and followed after 48h by human chorionic gonadotropin (hCG) (7.5 IU. ip). Two-cell mouse embryos were obtained from female mice oviduct after 48 h. The embryos transferred bilaterally into pseudopregnant mice of the same strain through surgical procedure and 8-14 embryos were transferred to each tube. The study included 4 treatment groups and one control group (6 mice in each group). The treatment groups were exposed to subcutaneous injection of concentrations of 100 µm , 10 µm , 1 µm and 100 nm of melatonin. After the cesarean on 18th day of pregnancy, the percentage of live births was assessed. The outcomes of the live birth rate were as­sessed using the chi-square test and statistical analyses were carried out using SPSS version 16.0. Percentage of live birth was calculated and compared with the control group. Results: A total of 701 two-cell mouse embryos were transferred into one control group and four experimental groups. The number and percentage of live births at concentrations of 100 µm and 10 µm of melatonin and the control groups were 21 (15.55%), 13 (9.15%) and 9 (6.47%), respectively. No infant was born at the concentrations of 1 µM and 100 nM of melatonin . The highest rate of live births was obtained at the concentration of 100 µM and showed a significant difference with the control group (p ? 0.01). There was no significant difference in live births at the concentration of 10 µm and control group. Conclusion : The results of this study indicated that subcutaneous injection of melatonin improves the two-cell mouse embryo growth and post implantation development of mice.