بررسي آثار كامپوزيت ژلاتين– كيتوسان بر كشت سلول‌هاي استرومايي مغز استخوان موش صحرايي

Investigating Effects of Gelatin-Chitosan Film on Culture of Bone Marrow Stromal Cells in Rat

مقدمه: ژلاتين و كيتوسان به عنوان بيوپليمرهای زيست سازگار و زيست تخريب‌پذير شناخته شده‌اند. هدف از مطالعه حاضر بررسی اثرات غشاء ژلاتين- كيتوسان بر روی زنده ماندن، تكثير، مرگ و تمايز سلول‌های استرومايی مغز استخوان موش صحرايی می‌باشد. روش بررسی: در اين مطالعه ابتدا فيلم كامپوزيتی ژلاتين- كيتوسان به وسيله قالب‌گيری مخلوط اين دو پليمر در اسيداستيك گلاسيال تهيه شد. پس از اينكه سلول‌های BMSC به مرحله پاساژ دوم رسيد، سلول‌ها در چهار گروه كشت شامل: پليت محيط كشت حاوی سلول و فاقد غشاء(شاهد)، پليت محيط كشت حاوی سلول و غشاء ژلاتين، پليت محيط كشت حاوی سلول و غشاء كيتوسان و پليت محيط كشت حاوی سلول و غشاء ژلاتين-كيتوسان كشت داده شدند. زنده بودن سلول‌ها در روزهای دوم، چهارم و ششم توسط رنگ تريپان بلو، تكثير سلولی از طريق شمارش سلول‌ها و مرگ سلولی توسط رنگ آميزی آكريدين اورنج مورد بررسی قرار گرفت. همچنين با بررسی بيان پروتئين Fibronectin و CD44 به روش ايمونوسايتوشيمی تمايز سلولی در روزهای دوم، چهارم و ششم در گروه‌های مختلف بررسی شد. نتايج: ميزان تكثير سلول‌ها در گروه كيتوسان در مقايسه با گروه شاهد كاهش معنی‌داری مشاهده شد(05/0p<). اما گروه‌های ژلاتين و ژلاتين-كيتوسان مشابه گروه شاهد بوده و سلول‌ها تقريباً به يك اندازه افزايش يافته بود. همچنين عدم تمايز سلولی در تمام گروه‌ها مشاهده شد. نتيجه‌گيری: نتايج نشان داد غشای ژلاتين-كيتوسان می‌تواند به عنوان مدلی مناسب از يك داربست زيست تخريب‌پذير در مهندسی بافت و سلول درمانی مورد استفاده قرار گيرد.

Introduction: Gelatin and Chitosan are known as biodegradable and biocompatible biopolymers. These biopolymers have recently received increasingly more attention for tissue engineering. The aim of this study was to survey of effects of Gelatin-Chitosan film in viability, proliferation, apoptosis and differentiation on bone marrow stromal cell (BMSCs) culture in rat. Methods: Fist, gelatin- chitosan composites film were prepared by solution mixing , of both biopolymer in %75 acetic acid. After two passage of BMSCs culture, cells in the four groups including control, gelatin, chitosan and chitosan-gelatin were grown. The cells viability during the second, fourth and sixth days by tripanblue, proliferation by cell account and cell apoptosis by Acridin Orange were examined. Also cell differentiation during the second, fourth and sixth day were evaluated by immunocytochemistry . Results: The results showed significant reduction in cell proliferation in chitosan alone group (P<0.05). But the gelatin and chitosan-gelatin groups were similar to the control group as the cell proliferation was increased. Also all groups had no cell differentiation. Conclusion: Results of proliferation,differentiation and apoptosis cultured BMSCs on a gelatin-chitosan film showed that gelatin-chitosan film can be used as a good model of a biodegradable scaffold in tissue engineering and cell therapy.