اثر طولاني مدت استرس اكسيداتيو، بر ساختار فاكتور 8 انعقادي نوتركيب

The effect of long-termexposure to oxidative stress on the structure of recombinant human coagulation factor VIII

چكيده زمينه و هدف: حضور عوامل اكسيدان، مقادير زيادي از محصولات واكنش‎هاي راديكال آزاد را در غشاي گلبول‎هاي قرمز و پروتيين‎هاي سرم ايجاد مي‎نمايد. هدف ازمطالعه حاضر بررسي تغييرات اكسيداتيو در فاكتور 8 انعقادي انسان با روش آناليز اسپكتروفتومتريك مي‎باشد. مواد و روش‎ها: در اين مطالعه تجربي،فاكتور 8 انعقادي نوتركيب انساني در شرايط هوازي به مدت 4 تا 28 ساعت در سيستم اكسيداسيون فلزي، حاوي ويتامين ث و يون‎هاي فرو قرار داده شد. سنجش گروه‎هاي كربنيل به عنوان يك شاخص براي ميزان اكسيداسيون پروتيين‎ها انجام شد. بدين منظور از معرف دي نيترو فنيل هيدرازين استفاده شد. واكنش اين معرف با گروه‎هاي كربنيل، موجب تشكيل مشتقات دي نيتروفنيل هيدرازون مي‎شود. غلظت اين مشتقات با روش اسپكتروفتومتري تعيين گرديد. يافته‎ها: در حضور ويتامين ث و يون‎هاي فرو، ميزان گروه‎هاي كربنيل در rHFVIII تغيير يافته بود. بررسي اثرات وابسته به دوز ويتامين ث نشان داد كه با افزايش غلظت، ميزان اكسيداسيون فاكتور 8 انعقادي نوتركيب انساني كاهش مي‎يابد، در حاليكه يون فرو موجب افزايش اكسيداسيون و تشكيل گروه‎هاي كربنيل در اين پروتيين مي‎شود. نتيجه‎گيري: نتايج حاصل نشان مي‎دهد كه افزايش گروه‎هاي كربنيل در فاكتور 8 انعقادي نوتركيب انساني، در ارتباط با توليد گونه‎هاي اكسيژن فعال است. هم‎چنين مكانيسم‎هاي آنتي اكسيدان به صورت وابسته به دوز و وابسته به زمان فعال مي‎شوند. واژگان كليدي: گروه كربنيل، استرس اكسيداتيو، فاكتور 8 انعقادي نوتركيب انسان

Abstract Background: The presence of oxidant agents yields higher levels of free radical reaction products in erythrocyte membrane proteins and serum proteins. The aim of this study is to investigate the oxidative modifications of recombinant human coagulation factor VIII (rHFVIII) by spectrophotometric analysis. Materials and Methods: In this experimental study, rHFVIII was incubated aerobically with vitamin C and ferro ions in metal catalyzed oxidation (MCO) system for 4 to 28 hr. Carbonyl assay was used as an index of protein oxidation. For this purpose, 2,4dinitrophenyl hydrazine (DNPH) was used. Reaction of this reagent with carbonyl groups produces dinitrophenylhydrazone derivatives that their concentration was estimated by spectrophotometry. Results: Carbonyl groups in rHFVIII changed in the presence of vitamin C and ferro ions. Dose-dependent effects of vitamin C showed a decrease in carbonyl groups of rHFVIII whileferro ions increased oxidation and carbonyl group formation in this protein. Conclusion: These findings indicate that changes in carbonyl groups in rHFVIII are related to the generation of reactive oxygen species. Also, antioxidant mechanisms are activated in a dose- and time-dependent manner. Keywords: Carbonyl group, Ooxidative stress, Recombinant human coagulation factor VIII