ساخت باكيلوويروس نوتركيب كد كننده توام پروتيين‌هاي هماگلوتينين، نورآمينيداز و ماتريكس ويروس آنفلوانزاي H1N1 خوكي و بيان آن در سلول‌هاي حشرات

Construction of a new recombinant baculovirus encoding HA, NA, and M1 proteins of swine influenza (H1N1) virus and its expression in insect cells

چكيده زمينه و هدف:تغييرات ژنتيكي ويروس آنفلونزا، هر ساله باعث ايجاد اپيدمي‌هاي جديد در سراسر دنيا مي‌شود. ساخت يك واكسن جديد به منظور پيش‌گيري از ويروس آنفلونزا در چند سال اخير هدف اصلي پژوهشگران بوده است. هدف ما از اين پژوهش،ساختن باكيلوويروس نوتركيبي است كه بتواند دو گليكوپروتيين سطحي آنتي ژنيك هماگلوتينين و نورآمينيداز، به همراه پروتيين ماتريكس ويروس آنفلوانزاينوع A را به طور مستقل بيان نمايد. مواد و روش‌ها: در اين مطالعه تجربي، ابتدا كاست سه گانه‌اي كه بيان هم‌زمان و مستقل سه ژن هماگلوتيني، نورآمينداز و پروتيين ماتريكس را تامين نمايد، طراحي و سنتز شد. اين كاست سپس در پلاسميد دهندهpFastBac1 كلون شد تا به پلاسميد دهنده pFastBacI HNM1 دست بيابيم. كلون مذكور در ميزبان E.Coli DH10Bac با انجام ترانسپوزيشن همسان، بكميد نوتركيب را ساخت. اين سازه پس از تاييد با PCR، براي تكوين باكيلوويروس نوتركيب در سلول‌هاي حشرات SF9 تراريخت شد. يافته‌ها: نتايج هضم آنزيمي، كلونينگ صحيح پلاسميد دهنده pFastBacI HNM1 را تاييد نمود. طول صحيح نواحي تكثير يافته هدف بر روي بكميد نوتركيب،دليل بر صحت نوتركيبي همسان بين پلاسميد دهنده pFastBacI HNM1 و بكميد موجود در E.Coli DH10Bac بود. آثار ضايعات سلولي SF9 به دنبال تراريختي با بكميد نوتركيب، نشان دهنده تكوين موفق باكيلوويروس نوتركيب بود.آناليز پروتيين‌هاي اين سلول‌ها نشان داد هر سه پروتيين هدف به طور موثر و هم زمان بيان يافته‌اند. نتيجه‌گيري: باكيلوويروس نوتركيب ساخته شده در اين طرح ويژگي‌هاي درست جهت قابليت استفاده در توليد ذرات شبه ويروسي آنفلوانزا ويژه استرين خوكي را دارد. واژگان كليدي: باكيلو ويروس، ساب تايپ H1N1، ويروس آنفلونزاي تيپA، ذرات شبيه ويروس

Abstract Background: Genetic variability of influenza viruses causes new epidemics worldwide annually. Development of a new vaccine for prophylaxis of influenza virus has been amajor objective in recent years. The aim of this study was to construct a recombinant baculoviruscapable of expressing the two surficial antigenic glycoproteins, hemagglutininand neuraminidase, as well as matrix proteinsof swine influenza (H1N1) simultaneously and independently. Materials and Methods: In this experimental study, first, a triplet cassette providing simultaneous and independent expression of target proteins was designed and subjected to synthesis. It was then cloned into pFastBac1 donor plasmid. Competent E.ColiDH10Bac cells were transformed by donor clone and the recombinant bacmids were produced following homologous transposition. This construction was verified by PCR and then transfected into Sf9 insect cells to package new recombinant baculoviruses. Results: Restriction map of pFastBacI HNM1 donor plasmid confirmed the fidelity of the clone. The results of PCR done on the recombinant bacmidas template indicated that a proper homologous recombination has occurred between pFastBacI HNM1 donor plasmid and the bacmid in E.ColiDH10Bac host cells. Protein analysis of the infected Sf9 cells showed that all target proteins were efficiently expressed at the same time. Conclusion: The recombinant baculovirus constructed in this studypossesses proper characteristics to produce swine influenza virus-like particles in Sf9 cells. Keywords: Baculovirus, H1N1 subtype, Influenza Avirus, Virus-like particle