جداسازي و تمايز سلول هاي بنيادي پالپ دندان به سمت ادونتوبلاست

Isolation and Differentiation of Dental Pulp Stem Cells into Odontoblastic Lineage

سابقه و هدف: با توجه به منابع محدود سلول هاي بنيادي يافتن راهكارهاي مناسب براي جداسازي و تكثير و تمايز اين سلول ها حايز اهميت مي باشد. يكي از منابع سهل الوصول سلول هاي بنيادي بالغ، پالپ دندان مولر سوم انسان مي باشد كه معمولا بدون استفاده مي ماند. اين سلول ها قابليت تمايز به انواع سلول ها را دارند. هدف از اين پژوهش جداسازي سلول هاي بنيادي از پالپ دندان مولر سوم انسان با روشي نوين، كشت اين سلول ها و سپس القا تمايز سلول هاي كشت داده شده به سمت ادونتوبلاست بود. مواد و روشها: در اين مطالعه تجربي تعداد 20 عدد دندان نهفته عقل جهت استخراج سلول هاي بنيادي مورد استفاده قرار گرفت. از روش كشت قطعات بافت پالپ هضم شده براي جدا سازي سلول هاي بنيادي استفاده شد. بيان برخي ژن هاي ماركر سلول بنيادي با روش RT-PCR در اين سلول ها بررسي شد. سپس اين سلول ها با استفاده از دگزامتازون و پروتيين شكل زاي استخوان (BMP-2) تحت القا براي تمايز ادونتوبلاستي قرار گرفتند و بيان ژن هاي ماركر ادونتوبلاست در سلول هاي تحت القا با روش هاي RT-PCR و ايميونوسيتوشيمي بررسي شد. يافته‌ها: سلول هاي بنيادي با بازدهي بالا از پالپ دندان جداسازي شدند و بررسي RT-PCR نشان داد اين سلول ها برخي ماركرهاي سلول بنيادي روياني را بيان مي كنند. سلول-هاي تحت القا ، ماركرهاي ادونتوبلاستي مثل DSPP، DMP-1، BMP7 و Osteopontin را بيان نكردند. همچنين پروتيين هاي DSPP و DMP-1 در سلول هاي تحت القا توليد نشدند. نتيجه گيري: علي رغم جداسازي موفقيت آميز سلول هاي بنيادي، با روش به كار رفته، سلول هاي القا شده به سمت ادونتوبلاست تمايز نيافتند كه اين امر مي تواند به خاطر روش تمايز، پاساژ دادن حين القا و يا كشت تك لايه باشد.

BACKGROUND AND OBJECTIVE: Limited resources for adult stem cells necessitate appropriate methods for isolation, proliferation and differentiation of these cells. Human third molar is an easily available source in this regard that usually remains unused. The aim of this study was to investigate the isolation, culture and odontogenic differentiation of human dental pulp stem cells. METHODS: In this experimental study, twenty human third molars were used for stem cell isolation. The digested pulp tissue culture approach was used to isolate stem cells. Some markers of stem cells were studied by RT-PCR. Stem cells were then induced towards odontoblast cells by use of BMP-2 and Dexamethasone. Expression of odontoblastic markers was investigated in induced cells by RT-PCR and immunocytochemistry methods. FINDINGS: The human dental pulp stem cells were isolated with high efficiency. RT-PCR analysis showed that these cells express some markers of embryonic stem cells. However, the induced cells did not expressed odontoblastic markers such as DSPP, DMP-1, BMP7 and Osteopontin. Also the induced cells did not produce DSPP and DMP-1 proteins. CONCLUSION: Despite the successful isolation of stem cells, the induced cells failed to differentiate into odontoblasts. This may be due to the differentiation method as well as the passage during induction or monolayer culture.