عنوان مقاله :
بررسي خواص آنتي ژنيك پروتيين نو تركيب هيالورونيداز A استرپتوكوك پيوژنز بيان شده در باكتري اشريشيا كلي
عنوان فرعي :
Antigenic characteristics of recombinant hyaluronidase A of Streptococcus pyogenes expressed in E. coli
پديد آورندگان :
مرادخاني، آذر نويسنده دانشجوي كارشناسي ارشد، واحد علوم و تحقيقات، دانشگاه آزاد اسلامي، تهران، ايران Moradkhani, azar , ابطحي، حميد نويسنده استاديار، گروه ميكروب شناسي و ايمني شناسي، مركز تحقيقات پزشكي و مولكولي دانشگاه علوم پزشكي اراك، اراك، ايران Abtahi, hamid , پاكزاد، ايرج نويسنده دانشكده پزشكي,گروه ميكروب شناسي, دانشگاه علوم پزشكي ايلام,ايران Pakzad, I. , كريمي، مسعوده نويسنده كارشناس آزمايشگاه ميكروب شناسي پزشكي، دانشگاه علوم پزشكي اراك، اراك، ايران Karimi, masoodeh
اطلاعات موجودي :
دو ماهنامه سال 1390 شماره 55
كليدواژه :
بيان ژن , E. coli , Hyaluronidase A Gene , Streptococcus pyogenes , استرپوكوك پيوژن , Gene expression , اشريشيا كلي , ژن هيالورونيداز A
چكيده فارسي :
چكيده
زمينه و هدف: هيالورونيداز A از جمله پروتيينهاي ترشحي استرپتوكوك پيوژن بوده كه داراي قدرت آنتي ژنيك ميباشد. امروزه با رديابي آنتي باديهاي ضد اين پروتيين روند عفونت ناشي از اين باكتري پيگيري ميشود. در اين تحقيق سعي گرديده تا توليد پروتيين نوتركيب هيالورونيداز A در باكتري اشريشيا كلي انجام گيرد.
مواد و روش ها: در اين تحقيق تجربي با طراحي پرايمر اختصاصي و استفاده از روش PCR، ژن هيالورونيداز A از استرپتوكوك پيوژن تكثير گرديد. پس از تخليص، ژن فوق در ناقل پلاسميدي pET32a جهت بيان كلون گرديد. سپس ساختار پلاسميدي pET32a -hylA وارد باكتري اشريشيا كلي سويه BL21- DE3-plySs شد. توليد پروتيين با القا توسط IPTG صورت گرفت. پروتيين نوتركيب با استفاده از كيت Ni-NTA خالص و ميزان پروتيين با استفاده از روش برادفورد اندازه گيري شد. آزمايش وسترن بلات براي تاييد پروتيين نوتركيب انجام شد.
يافته ها: ترادف نوكليوتيدي ژن تكثير شده توسط روش PCR با ژن هيالورونيداز A استرپتوكوك پيوژن يكسان بود. توليد پروتيين نوتركيب هيالورونيداز A با القا پلاسميد pET32a -hylA توسطIPTG انجام گرديد. تخليص پروتيين با روش كروماتوگرافي تمايلي و با استفاده از كيت Ni-NTA صورت گرفت. ميزان پروتيين خالص شده برابر 500 ميكروگرم در ميلي ليتر به دست آمد. سرم موش واجد آنتي هيالورونيداز A در روش وسترن بلات با پروتيين توليد شده واكنش داد.
نتيجه گيري: توليد پروتيين نوتركيب هيالورونيداز A در ميزبان اشريشيا كلي نيز امكان پذير است. پروتيين توليد شده خاصيت آنتي ژنيك خود را به خوبي حفظ ميكند.
واژگان كليدي: استرپوكوك پيوژن، اشريشيا كلي، بيان ژن، ژن هيالورونيداز A
چكيده لاتين :
Abstract
Background: Hyaluronidase A is an antigenic protein that is secreted by Streptococcus pyogenes. Nowadays, streptococcal infections are diagnosed by tracking down anti-hyaluronidase A antibodies. In this study, the attempt was made to generate recombinant hyaluronidase A in E. coli.
Materials and Methods: In this experimental study, through designing specific primers and polymerase chain reaction (PCR), hyaluronidase A gene was amplified and after purification, it was sub-cloned in plasmid expression vector pET32a. Then pET32a-hylA was transferred to E. coli BL21-DE3-plySs. Protein generation induced by IPTG. The recombinant protein was purified by Ni-NTA kit and its concentration was assayed by Bradford method. Western-Blot analysis was run for verifying the recombinant hyaluronidase A.
Results: The nucleotide sequencing of the gene amplified by PCR was the same as hyaluronidase A gene from Streptococcus pyogenes. Production of the recombinant hyaluronidase A via induction by pET32a-hylA plasmid was done through IPTG. The expressed protein was purified by affinity chromatography by Ni-NTA resin. The concentration of purified protein was 500µg/ml. analysis using a mouse anti-hyaluronidase A serum was reacted with the generated protein using Western-Blot analysis.
Conclusion: Recombinant HylA protein can be generated in E.coli and the resulting protein maintains its antigenic properties desirably.
Keywords: E. Coli, Gene Expression, Hyaluronidase A Gene, Streptococcus Pyogenes
عنوان نشريه :
مجله دانشگاه علوم پزشكي اراك
عنوان نشريه :
مجله دانشگاه علوم پزشكي اراك
اطلاعات موجودي :
دوماهنامه با شماره پیاپی 55 سال 1390
كلمات كليدي :
#تست#آزمون###امتحان
