جداسازي، شناسايي و اندازه گيري افلاتوكسين متصل به آلبومين در سرم

Isolation, detection, and quantification of aflatoxin-albumin adducts in serum of rats treated with aflatoxin B1

چكيده زمينه و هدف: افلاتوكسين‎ها و به خصوص افلاتوكسين B1، اثرات مرگ بار و جبران ناپذيري روي سلامت انسان و حيوانات دارند. هدف از انجام اين تحقيق، ارايه يك روش حساس، اختصاصي و نسبتاً سريع براي جداسازي، شناسايي و اندازه‎گيري افلاتوكسين متصل به آلبومين در سرم مي‎باشد. مواد و روش‎ها: در اين تحقيق تجربي- آزمايشگاهي سه گروه رات انتخاب و به عنوان كنترل مثبت (تيمار شده با افلاتوكسين (B1، منفي (بدون تيمار خاص) و استاندارد (تيمار شده با افلاتوكسين B1 راديواكتيو) مورد استفاده قرار گرفتند. پس از خون‎گيري از رات‎ها، سرم خون و سپس آلبومين سرم جداسازي شد. آلبومين توسط پروناز هيدروليز گرديد و در نهايت افلاتوكسين جدا شده از آلبومين به سيستم كروماتوگرافي مايع با كارايي بالا تزريق و با آشكارگر فلورسانس مورد شناسايي و اندازه‎گيري قرار گرفت. يافته‎ها: به كمك الكتروفورز روي ژل پلي اكريلاميد نشان داده شد كه آلبومين جدا شده از سرم كاملا خالص مي‎باشد. در روش كروماتوگرافي مايع با كارايي بالا، كمترين ميزان اندازه‎گيري براي افلاتوكسين متصل به آلبومين 60 پيكوگرم در ميلي‎ليتر تعيين گرديد. ميانگين ميزان افلاتوكسين در سرم رات‎هاي كنترل مثبت، 2/19 نانوگرم بر ميلي‎گرم آلبومين محاسبه شد. طي آزمايشات درون-سنجشي و بين سنجشي تكرار پذيري بسيار خوبي براي اين روش مشاهده گرديد. نتيجه گيري: ميزان افلاتوكسين متصل به آلبومين با ميزان دريافت افلاتوكسين متناسب است. اين تحقيق با استفاده از نمونه سرم رات طراحي شده اما از آنجايي كه آلبومين هيدروليز شده و از افلاتوكسين جدا مي‎شود روش فوق قابل استفاده براي اندازه‎گيري افلاتوكسين متصل به آلبومين در نمونه سرم انساني نيز مي‎باشد. واژگان كليدي: افلاتوكسين، افلاتوكسين B1، آلبومين، كروماتوگرافي مايع با كارايي بالا

Abstract Background: Aflatoxins, especially aflatoxin B1, have lethal effects on human and animal health. This study is intended to present a specific, sensitive, and relatively fast method for measurement, detection, and isolation of aflatoxin-albumin (Af-Alb) adducts in serum. Materials and Methods: In this experimental-trial, three groups of rats were selected and used as positive control (treated with aflatoxin B1), negative control (without treatment) and standard (treated with radioactive aflatoxin B1). After drawing blood samples from the rats, blood serum and then, serum albumin were isolated. Albumin was hydrolyzed by pronase and eventually, was injected into HPLC system. The sample was then identified and measured by fluorescence detector. Results: Electrophoresis on PAGE revealed albumin isolated from serum to be perfectly pure. In HPLC method, detection limit for the measurement of Af-Alb adduct was determined to be 60 pg/ml. The mean of aflatoxin positive control rats serum was 19.2 ng/mg albumin. In inter- and intra-group experiments, a remarkable level of reproducibility was seen for this method. Conclusion: The amount of Af-Alb adduct is proportionate to the amount of aflatoxin received. This project was conducted with rat serum sample, but since albumin is hydrolyzed and can be isolated from aflatoxin, this method is applicable to the measurement of Af-Alb adducts in human serum samples. Keywords: Aflatoxin, Aflatoxin B1, Albumin, HPLC