بررسي مولكولي ژن oapA در سويه‌هاي هموفيلوس آنفلوانزاي ايزوله‌شده از ايران، به‌عنوان كانديد در طراحي واكسن بومي ‌عليه اين باكتري

Molecular Analysis of Oapa Gene in Haemophilus influenzae Strains Isolated from Iran: As a Domestic Vaccine Candidate

زمينه و هدف: باكتري هموفيلوس آنفلوانزا مي‌تواند به‌عنوان پاتوژن بخش تنفسي انسان عمل كند. عفونت‌ ناشي از اين باكتري به‌طور سنتي به‌وسيله آنتي‌بيوتيك‌ها‌ درمان مي‌شود. استفاده از واكسن‌هاي كونژوگه در مهار بيماري‌هاي ناشي از اين باكتري نيز بسيار موفقيت‌آميز بوده است. در طراحي اين واكسن‌ها از كپسول پلي‌ساكاريدي هموفيلوس آنفلوانزا و پروتيين‌هاي ايمونوژن استفاده مي‌شود. اين مطالعه با هدف بررسي مولكولي ژن oapA به‌عنوان ژن پروتيين ايمونوژنيك حفاظت‌شده و كانديد در طراحي واكسن انجام شد. روش بررسي: تعدادي سويه باليني هموفيلوس آنفلوانزا از بيمارستان ميلاد در تهران تهيه و پس از انجام تست‌هاي تشخيصي موجود، تست‌هاي بيوشيميايي جهت تشخيص بيوتايپ سويه‌ها انجام گرفت. در ادامه، DNA از طريق جوشاندن، استخراج و واكنش PCR اختصاصي جهت آناليز مولكولي ژن oapA طراحي گرديد. در نهايت، تعيين توالي محصولات PCR، به‌منظور تاييد نتايج صورت گرفت. يافته‌ها: نتايج واكنش PCR نشان داد 79% از سويه‌هاي مورد بررسي، حدود 99-95% به توالي‌هاي نوكليوتيدي ژن oapA هموفيلوس آنفلوانزادر NCBI شباهت دارند و21% باقيمانده از سويه‌هاداراي يك حذف حدود 125 نوكليوتيديبوده و 96-94% شبيه به توالي‌هاي موجود در NCBI هستند. در همه سويه‌هايي كه اين حذف 125 نوكليوتيدي را نشان دادند (سويه‌هاي non-typeable و سويه‌هاي تيپ b) شباهت 99-95% برقرار بود.نتايج تعيين بيوتايپ نشان داد سويه‌هاي مورد مطالعه، مربوط به بيوتايپ‌هاي مختلف مي‌باشد. نتيجه‌گيري: طبق نتايج اين مطالعه پيشنهاد مي‌شود استفاده از پروتيين ژن حفاظت‌شده oapA در توليد واكسن عليه تيپ b اين باكتري بيشتر مورد توجه قرار گيرد.

Background and Objectives: Haemophilus influenzae is a bacterium that can act as a pathogen of human respiratory tract. Its infections have been traditionally treated with antibiotics, and then the use of conjugate vaccines has been very successful in prevention of infectious diseases. These vaccines consisted of capsular polysaccharide of H. influenzae with an immunogenic protein. The aim of this study was molecular analysis of oapA gene in Iranian H. influenzae strains as a conserve immunogenic protein for vaccine candidate. Methods: Clinical H. influenzae strains were collected from Milad Hospital in Tehran, and cultured on chocolate agar. After diagnostic test, biochemical tests were performed for distinguishing strains biotype. The DNA extracted by boiling method and specific PCR reactions were designed for oapA gene molecular analysis. Finally sequencing of PCR products was performed for confirming our results. Results: The results of PCR exhibited that 79% of clinical samples had 95-99% similarity to NCBI sequences of H. influenzae oapA gene, and the remaining 21% had a 125 nucleotide deletion and 94-96% similarity to NCBI sequences. Also this study showed that all strains having 125 nucleotide deletion (Nontypeable H. influenzae and H. influenzae type b) had 95-99% similarity to NCBI sequences. The results of determining the biotype revealed that the studied strains were related to different biotypes. Conclusion: The results of this study suggested that use of oapA gene protein for production of vaccine against H. influenzae type b be further considered.