كاهش بيان نسبي ژن هاي مرتبط با آپوپتوسيز در سلول گرانولوزا با افزودن استراديول

Decreasing the Relative Gene Expressions Associated With Apoptotic Factors in Granulosa Cells by Adding Estradiol

هدف از پژوهش حاضر بررسي اثرات آپوپتوتيك افزايش تراكم سلول‌هاي گرانولوزا و افزايش استراديول بر بيان نسبي ژن هاي مرتبط با آپوپتوسيز (Bcl-2، Bax و GADD45B) و چرخه سلول (CCDN-2) بود. به همين منظور بعد از جمع آوري تخمدان گاوها از كشتارگاه، سلول‌هاي گرانولوزاي فوليكول هاي 4 تا 8 ميلي متري جداسازي شدند. سپس تعداد سلول هاي زنده شمارش شده و نمونه سلول‌هاي گرانولوزا براي شش روز كشت داده شدند. تيمارها شامل 1) 500 هزار سلول در 1000 ميلي ليتر مايع كشت (كنترل)، 2) 500 هزار سلول در 500 ميلي ليتر مايع كشت (گروه آپوپتوتيك: افزايش تراكم دليل آپوپتوتيك بودن است) و 3) 500 هزار سلول در 500 ميلي ليتر مايع كشت و افزودن استراديول از روز دوم كشت (گروه آپوپتوتيك + استراديول) بودند. همچنين، بيان ژن‌هاي مرتبط با آپوپتوسيز و چرخه سلولي و غلظت استراديول نمونه ها بررسي شد. نتايج نشان داد بيان نسبي ژن‌هاي Bax و GADD45B در گروه آپوپتوتيك نسبت به دو گروه ديگر بيشينه بود، ولي با افزودن استراديول بيان نسبي آنها كاهش يافت و به سطح كنترل بازگشت. نسبت Bcl-2 به Bax در گروه آپوپتوتيك نسبت به دو گروه ديگر كاهش يافت، در حالي كه با افزودن استراديول اين نسبت به طور معني داري افزايش نشان داد ولي همچنان مقدار آن نسبت به گروه كنترل كمتر بود. بيان نسبي ژن CCDN-2 در گروه آپوپتوتيك نسبت به دو گروه ديگر كمينه بود ولي اختلاف معني داري بين گروه استراديول و گروه كنترل ديده نشد. به طور كلي نتايج پژوهش حاضر نشان داد استراديول مي تواند سلول‌هاي گرانولوزا را در برابر آپوتوزيس ناشي از افزايش تراكم محافظت كند و اين كار را ممكن است از راه افزايش سرعت چرخه سلولي گامه G1 به S انجام دهد.

The objective of this study was to evaluate the apoptotic effects of increasing granulosa cell density and increasing estradiol on relative gene expression associated with apoptosis factors (Bcl-2, Bax and GADD45B) and cell cycle (CCDN-2). For this reason after collecting ovaries of cows from an abattoir, granulosa cells were separated from 4- to 8-mm follicles. Then, viable cells were counted and granulosa cell samples were cultured for 6 days. Treatments were included 1) 500,000 cell/1000 ml liquid culture (Control), 2) 500,000 cell/500 ml liquid culture (apoptotic group: increasing cell density cause apoptosis), 3) 500,000 cell/500 ml liquid culture and estradiol from day two of culture (apoptotic group+estradiol). Also, expression of genes associated with apoptosis factors and cell cycle, and estradiol of samples were evaluated. Results showed relative gene expression of Bax and GADD45B was greatest in apoptotic group compared to two other groups; but, with adding estradiol expression of these two genes decreased to control level. Bcl-2/Bax ratio decreased in apoptotic group compared with two other groups; while, adding estradiol significantly increased this ration, but, still it was lower than control group. Relative gene expression of CCDN-2 was lowest in apoptotic group compared to two other groups; but, no significant difference was observed between control and estradiol group. Overall results of the present study showed that estradiol can protect granulosa cells against apoptosis induced with increasing in cell density and probably it was done through progression of the cell cycle from G1 to S stage.