بررسي فيلوژنتيكي گونه Charybdis hellerii (سخت‌پوستان، خرچنگ‌ها) در سواحل بين جزر و مدي چابهار بر اساس توالي ژني قطعه‌ي 1 ژن سيتوكروم اكسيداز (CO1)

Phylogeny of Charybdis hellerii (Decapoda, Crabs) in intertidal coasts of Chabahar based on cytochrome oxidase subunit 1 (CO1) gene sequence

سابقه و هدف: Charybdis hellerii گونه‌ي بسيار شناخته ‌شده‌اي در اقيانوس هند است. بررسي‌هاي مولكولي فراواني بر روي اين ‌گونه در ساير نقاط دنيا انجام شده است. در ايران مطالعات مولكولي بر روي خرچنگ‌ها نسبت به مطالعات ريخت‌شناسي سهم بسيار كم تري را به خود اختصاص داده اند. در تحقيق حاضر براي اولين بار در ايران به بررسي مولكولي گونه‌ي Charybdis hellerii جنس Charybdis پرداخته شده است. مواد و روش‌ها: نمونه برداري در سال 1392 در سواحل ماسه اي چابهار و در هنگام جزر كامل صورت گرفت. سپس نمونه هاي به آزمايشگاه براي نگهداري در دماي 20- منتقل شدند. براي استخراج DNA برش بافتي از آبشش نمونه‌ها جدا گرديد. عمل استخراج DNA با استفاده از روش Hexadecyltrimethylammonium bromide (CTAB) انجام گرفت. واكنش زنجيره‌اي پليمراز (PCR) انجام شد. پس از توالي يابي، درخت فيلوژني گونه‌ي مورد نظر رسم گرديد. يافته‌ها: با بررسي‌هاي مورفولوژي گونه مورد مطالعه Charybdis hellerii شناسايي گرديد و بررسي‌هاي مولكولي داده هاي مورفولوژي را تاييد كردند. توالي نوكليوتيدي به دست آمده در قطعه‌ي 1 ژن سيتوكروم اكسيداز(CO1) مورد آناليزهاي مولكولي قرار گرفت. با آناليزهاي انجام‌شده و ترسيم درخت فيلوژني مشخص شد كه گونه‌ي ايراني با 94 درصد بوت استرپ حمايت با گونه C. hellerii در يك كلاد قرار گرفته است. نتايج: نتايج حاصل از آناليز Maximum Liklihood نشان داد كه گونه ي مورد نظر دركلاد Eubrachyura قرار مي‌گيرد كه 94 درصد شبيه به Charybdis hellerii است و در يك گروه خواهري قرار گرفتند. آناليزهاي مولكولي نتايج حاصل از بررسي هاي موفولوژي را تاييد مي كند.

Background:Charybdis hellerii is a well-known species in the Indian Ocean. There are many molecular researches on this species all over the word. Molecular researches on Iranian water crabs are very scarce; however there are several comprehensive morphological studies. In this paper, for the first time, phylogeny of Charybdis hellerii from Iranian waters are studied. Materials and Methods:Specimens were collected in 2013 from sandy sediments of shallow-waters in Chabahar Bay at full tide. Collections were transported to the laboratory and preserved in -20 degrees. The gill tissue was used for DNA extraction. The Hexadecyltrimethylammonium bromide (CTAB) method was used to extract DNA. Polymerase Chain Reaction (PCR) was then carried out. The sequencing alignments were conducted and phylogenic tree was obtained. Results:The crab sample was identified as Charybdis hellerii by morphological analysis confirmed by molecular analysis. Nucleotides sequence of the cytochrome oxidase subunit 1 (CO1) gene was analyzed. The phylogenetic analysis was conducted and found that the Iranian species with other Charybdis hellerii are in a clade and support with 94% bootstrap. Conclusion:The maximum Likelihood phylogenetic analysis showed that the Iranian species is in the Eubrachyura clad and with 94% bootstrap support is a sister group Charybdis hellerii. The molecular results were also confirmed by morphological features.