جداسازي باكتريهاي بومي توليد كننده آنزيم كلسترول اكسيداز از خاك، آب ، پساب كارخانه هاي چرم و پوست ، صابون سازي و فراورده هاي لبني

Isolation of native microorganisms producing cholesterol oxidase enzyme from soil, water, wastewater of leather and soap factories, and dairy products

مقدمه: كلسترول اكسيداز آنزيمي است كه اكسيداسيون كلسترول را همراه با احياي اكسيژن مولكولي به پراكسيدهيدروژن انجام مي دهد . اين آنزيم توسط برخي ميكروارگانيسم هاي بيماريزا و غير بيماريزا توليد مي شود و ازمهمترين آنزيم هاي تجاري دنياست كه كاربردهاي وسيعي در صنايع مختلف پيدا كرده است. هدف از اين مطالعه جداسازي باكتريهاي بومي مولد كلسترول اكسيداز و تعيين هويت آنها با استفاده از روشهاي ميكروبي، بيوشيميايي و ژنتيكي مي باشد. ? بحث و نتيجه گيري: در اين مطالعه، باكتريهاي بومي مولد كلسترول اكسيداز جدا گرديد. اين دو باكتري بواسطه خصوصيات مورفولوژيكي، بيوشيميايي و روشهاي تاييد مولكولي جز گونه Rhodococcus طبقه بندي گرديد. يافته ها: از 187 نمونه ،تنها 2 باكتري از خاك جداسازي گرديد و نتايج نشان داد كه متعلق به گونه رودوكوكوس مي باشند . همچنين در آزمايش قهوه اي نمودن و رنگ سنجي، فعاليت كلسترول اكسيدازي هر دو باكتري تاييد شد. هويت مولكولي سويه هاي مزبور با تعيين توالي ژن 16s rRNA تاييد شد. مواد و روش ها: تعداد 187 نمونه از پساب كارخانه چرم وپوست و صابون سازي ، خاك ، لبنيات و آب هاي راكد جمع آوري گرديد. پس از كشت نمونه ها، باكتريهاي رشد يافته با تست هاي ميكروبي و بيوشيميايي تعيين هويت گرديد. براي تاييد فعاليت كلني هاي مولد آنزيم كلسترول اكسيداز، روشهاي رنگ سنجي و قهوه اي نمودن محيط كشت استفاده شد. از تكنيك 16s rRNA PCR براي تاييد قطعي سويه هاي بدست آمده استفاده شد.

Background : Cholesterol oxidase (CHO) is an enzyme that catalyzes cholesterol oxidation and produces hydrogen peroxide (H2O2). This enzyme is produced by certain pathogenic and non-pathogenic microorganisms and is a commercially important enzyme in the world which has found wide application in various industries. The aim of the study was to isolate native bacteria producing CHO and their identification using microbial, biochemical and molecular methods. Materials and Methods: A total of 187 samples were collected from wastewater of leather and soap factories, soil, dairy products, and stagnant water. After the samples were cultured, the bacteria were identified using the microbial and biochemical tests. Then, the methods of colorimetric and browning of culture medium were applied to select the colonies producing CHO.PCR 16s rRNA technique was used for final confirmation of obtained strains. Results: Of the 187 collected samples, two microbial samples were isolated, both of which from the soil samples. The results of the biochemical tests showed that the two bacteria were Rhodococcus. Both methods of colorimetric and browning of culture medium confirmed the activity of CHO. Molecular identification of these strains were also confirmed by sequencing 16s rRNA gene. Conclusion: In this study, native bacteria producing CHO were isolated. These two bacteria were classified as Rhodococcus using morphological, biochemical and molecular methods.