تأثير هم‌كشتي جوانه دمي جنين موش (10/5- 9/5 روزه) بر بلوغ آزمايشگاهي تخمك موش

Effect of Mouse Embryo Tail Bud Co-culture on In vitro Maturation of Mouse Oocyte

سابقه و هدف: بلوغ تخمك در شرايط آزمايشگاهی روش مناسبی برای درمان ناباروری است كه استفاده كلينيكی آن به‌واسطه موفقيت پايين با محدوديت مواجه است. لذا اين مطالعه با هدف بررسی تأثير همكشتی جوانه دمی جنين موش بر بلوغ تخمك‌های نارس موش طراحی شده است. مواد و روش‌ها: تخمك‌های نابالغ از موش‌های ماده نژاد NMRI 48 ساعت بعد از تزريق IU 5/7 از PMSG (pregnant mare serum gonadotropin) به دست آورده شدند. تخمك‌ها در محيط α-MEM حاوی ده درصد FBS به چهار گروه تقسيم شدند. محيط بلوغ برای گروه كنترل مثبت حاوی 7.5 واحد بين‌المللی در ميلی‌ليتر hCG، برای گروه كنترل منفی فاقد hCG و برای گروه‌های آزمايش 1 و 2 حاوی محيط گروه كنترل منفی با هم‌كشتی جوانه دمی جنين 10.5- 9.5 و 13-12 روزه موش بود. تخمك‌های هر گروه در انكوباتور CO2 دار كشت شدند. بلوغ تخمك‌ها با استفاده از ميكروسكوپ معكوس پس از 24 ساعت ثبت شد. تجزيه و تحليل داده‌های خام به‌وسيله نرم‌افزار SPSS، Anova انجام گرفت. يافته‌ها: ميزان بلوغ آزمايشگاهی در گروه‌های كنترل مثبت، كنترل منفی، گروه تجربی يك و دو به ترتيب 52، 48، 66 و 50 درصد بود كه اين ميزان افزايش معنی‌داری (P<0.05) را در تخمك‌های متافاز ميوز II در گروه تجربی يك (در حضور جوانه دمی جنين موش 10.5-9.5 روزه) نسبت به گروه كنترل منفی و گروه تجربی دوم نشان داد. استنتاج: هم‌كشتی تخمك با جوانه دمی جنين موش 10.5-9.5 روزه، بلوغ تخمك نابالغ را افزايش می‌دهد.

Background and Purpose: In vitro maturation of oocyte is a promising technology in treatment of infertility, however, its clinical application is still limited due to poor success rate. This study was devised to evaluate the effect of mouse embryo tail bud co-culture on maturation of immature mouse oocyte. Materials and Methods: Immature oocytes were recovered from NMRI female mice 48hr after injection of 7.5 IU PMSG (pregnant mare serum gonadotropin). Oocytes were divided into four groups in α-MEM medium containing 10% FBS. The maturation medium for positive control group contained hCG, while for negative control group it was without hCG. In experimental groups 1 and 2 the maturation medium contained no hCG, but 9.5-10.5 and 12-13 days mouse embryo tail bud. The oocytes in each group were cultured in CO2 incubator. The oocytes maturation was recorded under an invert microscope after 24 hr. Data analysis was performed applying ANNOVA in SPSS. Results: In vitro maturation rate in positive control group, negative control group, experimental groups 1 and 2 were 52, 48, 66 and 50%, respectively. These rates indicated a significant increase in matured MII oocytes (in the presence of 9.5-10.5 days mouse embryo tail bud) than those of the negative control group and the second experimental group (P<0.05). Conclusion: Co-culture of oocyte with 9.5-10.5 days mouse embryo tail bud, increased the maturation rate of immature oocyte