تشخيص سريع و آسان ليستريا منوسيتوژنز در نمونه هاي ادرار زنان به كمك واكنش زنجيره اي پلي مراز و پروب فليورسنتي ژن hly A

A fast and easy detection for Listeria monocytogenes in urine of women using polymerase chain reaction and fluorescent probes hlyA gene

سابقه و هدف: ليستريا منوسيتوژنز يكي از عوامل ايجاد كننده عفونت بدون علامت دستگاه ادراري-تناسلي است كه مي تواند موجب عفونت نوزادان و مرگ جنين شود. با توجه به چالش هاي ناشي از كشت اين باكتري، اين پژوهش با هدف تشخيص ليستريا در ادرار به كمك واكنش زنجيره اي پلي مراز با استفاده از پروب فلويورسنتي انجام شد. مواد و روش ها: اين پژوهش به صورت مقطعي-توصيفي بر روي 100 نمونه ادرار بيماران مراجعه كننده به مركز تخصصي زنان و زايمان در شهرهاي لارستان و جهرم انجام شد. ابتدا با استفاده از سويه استاندارد حساسيت تكنيك مورد ارزيابي قرار گرفت. سپس پروب ژن hly­A طراحي و با استفاده از واكنش زنجيره اي پلي مراز، ميزان فلويورسنت با دستگاه ردياب فلويورسنت تعيين گرديد. يافته ها: با استفاده از سنجش FLASH-PCR محدوده رديابي 5 تا 10 ژن باكتري در هر واكنش تعيين شد. از مجموع 100 نمونه باليني، در 30 مورد (30%) با استفاده از پروب فليورسنتي ژن hly­A ليستريا شناسايي گرديد. نتيجه گيري: نتايج اين مطالعه نشان داد كه براي شناسايي مولكولي ليستريا، پروب فلورسنتي سرعت، حساسيت و ويژگي بالايي دارد و مي تواند جايگزين مناسبي براي الكتروفورز باشد. از اين رو با توجه به دقت و غير تهاجمي بودن اين روش، انجام مطالعات گسترده تر به منظور پايش ليستريا در نمونه هاي باليني پيشنهاد مي گردد. Background & Objectives: Listeria monocytogenes is one of the etiologic causes of asymptomatic infection that can cause urogenital tract infection in infants and fetal death. Given the challenges posed by growing the bacteria, this study aimed to detect Listeria in urine using polymerase chain reaction and fluorescent probes. Materials & Methods: This cross-sectional study was carried out on 100 urine samples obtained from the patients who were referred to a specialized center for women in Jahrom and Larestan. The sensitivity of the technique was evaluated using a standard strain. Then hlyA gene probes were designed using the polymerase chain reaction, and fluorescence level was determined by fluorescent probes. Results: Based on FLASH-PCR assay between 5 to 10 genes were detected in each reaction. Using fluorescent probes for L. monocytogenes hlyA gene overall, 30 out of 100 clinical samples (30%) were infected to this bacterium. Conclusion: The results showed that fluorescent probe increase speed, sensitivity and specificity of the molecular identification of Listeria and therefore it can be a suitable alternative to electrophoresis. Thus, with respect to the accuracy of this non-invasive method it is possible to monitor larger amounts of samples suspected to L. monocytogenes infections.