مطالعه‌ي بيان دو واريانت p63 (d4TAp63 و ΔNp73L) به عنوان ماركر ملكولي در تشخيص و پيش آگهي سرطان پستان

Evaluation of the two variants of p63(d4TAp63& ΔNp73L) expression as molecular markersin the diagnosis and prognosis of breast cancer

چكيده سابقه و هدف : ژن TP63، بعنوان قديمي‌ترين همولوگ TP53، دو واريانت N-ترمينالي اصلي را بوسيله‌ي پروموتور‌هاي مختلف كد مي‌كند : واريانت TAp63 با فعاليت سركوبگري تومور و ?Np63 با فعاليت انكوژني. در اثر حذف اگزون شماره‌ي 4 هر يك از واريانت‌هاي مذكور، دو واريانت N-ترمينالي ديگر نيز در دهه‌ي گذشته براي p63 گزارش شد :d4TAp63 و ?Np73L ، اما همچنان عملكرد دقيق اين واريانت‌ها در سلول‌هاي سالم و توموري مشخص نشده‌است. در اين مطالعه الگوي بياني واريانت‌هاي p63 و صلاحيت بيان واريانت‌هايd4TAp63 و ?Np73L به عنوان ماركر مولكولي بالقوه در تشخيص تومورهاي پستان مورد ارزيابي قرار گرفت. مواد و روش‌ها : در مجموع در 30 نمونه‌‌ي توموري و 20 نمونه ي مربوط به حاشيه‌ي تومور ارزيابي بيان ژن با استفاده از تكنيك RT-nested PCR نيمه كمي انجام شد. نتايج بدست آمده با استفاده از نرم‌افزار SPSS نسخه16 مورد تجزيه و تحليل آماري قرار گرفتند. يافته‌ها : واريانت‌هاي d4TAp63 و ?Np73L همواره در تمامي نمونه‌هايي كه واريانت‌هاي TAp63 و ?Np63 بيان دارند، بطور همزمان با واريانت‌هاي طويل مربوطه بيان مي‌شوند. در نمونه‌ها‌‌ي توموري و حاشيه‌ي تومور ميانگين شدت بيان واريانت‌ ?Np73L بطور معني داري بالاتر از ميانگين شدت بيان براي واريانت d4TAP63 مي‌باشد (به‌ترتيب 009/0= Pو008/0= P) . سطح بيان واريانت ?Np63 نيز در نمونه‌هاي توموري و حاشيه‌ي تومور نسبت به TAp63 بالاتر مي‌باشد كه در نمونه‌هاي توموري اين اختلاف معني دار بوده(03/0=P). اما در حاشيه‌ي تومور اختلاف بين اين دو گروه معني دار نمي‌باشد (11/0P=). نتيجه‌گيري : نتايج بدست آمده فعاليت مهار كنندگي غالب منفي ?Np63 و نقش احتمالي آن به عنوان انكوژن را در سرطان پستان مطرح مي‌كند. واريانت ?Np73L نيز در مقايسه با d4TAp63 ، در بافت‌هاي توموري و سالم پستان احتمالا مي‌تواند بعنوان واريانت غالب منفي عمل مي‌كند و هر دو واريانت ?Np73L و d4TAp63 با داشتن الگوي بياني مشابه واريانت‌هاي طويل مربوط به خود (?Np63 وTAp63) و ضمن بيان همزمان با اين واريانت‌ها احتمالا در تقويت عملكرد انكوژنيك و سركوبگر توموري آنها در سلول‌هاي سالم و توموري پستان نقش دارند. از سوي ديگر با توجه به الگوي بياني واريانت‌هاي ?Np73L و d4TAp63 آنها را نمي‌توان به عنوان ماركر ملكولي در تشخيص تومورهاي پستان در نظر گرفت. واژه هاي كليدي: بيان، ژن TP63 ، سرطان پستان، ماركر مولكولي، واريانت d4TAp63 ، واريانت ?Np73L

ABSTRACT BackgroundandAim: The TP63 gene, as the oldest homologue ofTP53, encodes two main N-terminal variants by different promoters: the trans-activatingvariant,TAp63 with tumor suppressor activity and the amino terminal truncated variant,?Np63 with oncogenic activity. As the result of the deletion of exon 4 in each of the variants, two further N-terminal variants have been reported for p63 in the last decade: d4TAp63 and ?Np73L, but the exact function of these variants have not been determined in normal and tumoral cells. In this study we evaluated the expression pattern of p63 variants and usefulness of d4TAp63and?Np73L as potential diagnostic molecular markers in breast cancer. Materials and Methods: In this study 30 tumoral and 20 non tumoral samples of marginal tissueswere studied by use of Semi-quantitative Reverse Transcriptase-nested PCR (RT-nPCR) method. SPSS16 software was used for data analysis. Results: In all cases with expression ofTAp63and?Np63 variants,d4TAp63 and ?Np73Lvariants were alwaysexpressed with their long variantssimultaneously.Intumoral andmarginalsamples?Np73L meanexpression levelwassignificantlyhigher than the meanexpression levelof d4TAP63 (P = 0.009&P=0.008 respectively). ?Np63expressionlevelsintumoral andmarginalsampleswere also higherthan those ofTAp63, which had a statistically significant difference intumoral samples(P=0.03), but no significant difference was detected in marginal samples(P = 0.11). Conclusion:The resultsindicateddominantnegativeinhibitoryactivity of ?Np63and its potential roleasanoncogeneinbreast cancer. ?Np73Lvariant compared tod4TAp63,intumoral and non tumoralbreasttissuescan actasdominantnegativevariant.Bothvariants(?Np73Landd4TAp63)withsimilarexpression patternsto their respective longer variants(?Np63andTAp63)andsimultaneous expression with their variants are likely to be involved in strengthening the tumor suppressor activity in normal and tumoral breast cells. On the other hand, according to the expressionpatterns of?Np73Landd4TAp63variants,theycannotbe consideredasmolecular markers in the diagnosis ofbreast tumors. Keywords: Expression, TP63 gene, Breast cancer, Molecular markers,d4TAp63 variants, ?Np73L variants.