ژنوتايپينگ گونه‌هاي بورخولدريا سپاسيه در بيماران سيستيك فيبروزيس به روش ژل الكتروفورز در ميدان ضرباني

Identification of Burkholderia cepacia in patients with cystic fibrosis by pulsed-field gel electrophoresis

زمينه و هدف: كمپلكس بورخولدريا سپاسيه يكی از عوامل مهم عفونت‌های جدی در بيماران مبتلا به فيبروز سيستيك است. هدف از اين مطالعه، ژنوتايپينگ گونه‌های بورخولدريا سپاسيه در بيماران سيستيك فيبروزيس به روش Pulsed-Field Gel Electrophoresis (PFGE) و نسبت تنوع گونه‌های كمپلكس بورخولدريا سپاسيه جدا شده از نمونه‌های بالينی بود. روش بررسی: در اين مطالعه توصيفی، طی 12 ماه در سال 91-1390، 100 نمونه ترشحات ريوی از بيماران سيستيك فيبروزيس مراجعه‌كننده به بيمارستان مسيح دانشوری جمع‌آوری شد. پس از تلقيح نمونه‌ها بر روی محيط كشت Burkholderia Cepacia Selective Agar (BCSA) و انكوباسيون، كلنی‌های مشكوك جدا و با استفاده از تست‌های بيوشيميايی و فنوتيپی شناسايی شدند. به منظور تاييد بيش‌تر با روش ليز قليايی، DNA باكتری استخراج و با Polymerase Chain Reaction (PCR) و بررسی ژن recA انجام شد. به منظور شناسايی پُلی‌مورفيسم و تنوع تايپی سويه‌های جدا شده بورخولدريا سپاسيه از الكتروفورز ضربان متناوب (PFGE) با استفاده از آنزيم با طيف اثر محدود (XbaI و SpeI) نيز استفاده شد. يافته‌ها: از 100 نمونه مورد بررسی، پنج ايزوله به‌عنوان بورخولدريا سپاسيه شناسايی گرديد. اطلاعات به‌دست آمده در الكتروفورز محصولات PCR و مقايسه باندهای ايجاد شده در نمونه‌های بيماران با سوش استاندارد ATCC 25416 بورخولدريا سپاسيه و مقايسه و آناليز باندهای PFGE با سايز ماركر باكتری Salmonella choleraesuis سروتايپ Braenderup سويۀH9812 ، يكسان بود. نتيجه‌گيری: وجود الگوی پالس تايپ مشابه در طول مطالعه مويد اين فرضيه است كه عامل شناسايی شده در اين مطالعه از يك منبع منتشر شده باشد. بنابراين فرضيه انتقال ارگانيسم فرد به فرد رد و ضرورت دارد كه در مطالعات بعدی از منابع محيطی نمونه‌برداری شود.

Background: Complex of Burkholderia cepacia is one of the main and serious causes of infections in cystic fibrosis patients that can be highly transmissible. Small hospital outbreaks are frequent and are usually due to a single contaminated environmental source. The pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) is widely used to identify the strain emission sources in cystic fibrosis patients. The aim of this research was to study genotyping of Burkholderia cepacia using PFGE method, and to evaluate diversity complex of clinical strains isolated from cystic fibrosis patients. Methods: This is a descriptive study, in which 100 pulmonary secretion specimens of cystic fibrosis patients admitted in Masih Daneshvari Hospital, Tehran Iran in period of 12 months 2012 to 2013 were collected. The specimens were cultured on BCSA plate’s. After incubation suspected colonies were isolated and identified by biochemical and phenotypic method. All samples were checked by API system (API20NE) and by specific PCR method for genus Bulkhorderia and Bcc as well. DNA was extracted by alkaline lysis method and confirmed by PCR analysis of recA genes. Genetic diversity of isolate was performed by PFGE analysis according to Pulsenet guideline by using XbaI, SpeI as restriction enzyme which digests infrequently among the Burkholderia cepacia genome. Results: Out of 100 samples five were identified as Burkholderia cepacia. It is obviously different at variously reports. The electrophoresis data of PCR products and comparison of band in samples from patients with standard strain ATCC 25416 Burkholderia cepacia and compare and analyse the PFGE size marker bands of Salmonella choleransuis serotype Braenderup H9812 strain, were the same. Conclusion: Application of PFGE and identification of pulse-type is a potential tool to enhance the investigation of apparent nosocomial outbreaks of B.cepacia. Similar type of pulse patterns was observed in this study means that all of infection has been from one source; therefore the hypothesis of transferring person to person will be rejected. Base on these results environmental sources sampling should be considered in future investigation.