عنوان مقاله :
نقش اسيدهاي آمينه هيستيدين 16، تيروزين 82 و تريپتوفان 86 در شيفت نوري، فعاليت و پايداري حرارتي فوتوپروتيين اكورين
عنوان فرعي :
The role of His 16, Tyr 82 and Trp 86 in color shift, activity and thermostability of aequorin photoprotein
پديد آورندگان :
قنبرطلب ، فايزه نويسنده گروه مهندسي ژنتيك، پژوهشكده فناوري زيستي، دانشگاه صنعتي مالك اشتر، تهران Ghanbartalab, Faeze , زين‌الديني، مهدي نويسنده گروه مهندسي ژنتيك، پژوهشكده فناوري زيستي، دانشگاه صنعتي مالك اشتر، تهران Zeinoddini, Mehdi , حسين‌خاني، سامان نويسنده دانشگاه تربيت مدرس , , اسماعيل‌نژاد ، معصومه نويسنده گروه مهندسي ژنتيك، پژوهشكده فناوري زيستي، دانشگاه صنعتي مالك اشتر، تهران Esmailnejad, Masume , حسيني ، سيده الهه نويسنده گروه مهندسي ژنتيك، پژوهشكده فناوري زيستي، دانشگاه صنعتي مالك اشتر، تهران Hosseini, Seyede Elahe , لالي ، معصومه نويسنده گروه مهندسي ژنتيك، پژوهشكده فناوري زيستي، دانشگاه صنعتي مالك اشتر، تهران Laali, Masume
اطلاعات موجودي :
فصلنامه سال 1394 شماره 0
كليدواژه :
شيفت نوري , اكورين , پايداري حرارتي , جهش
چكيده فارسي :
زمينه: اكورين فوتوپروتييني حساس به كلسيم است كه از آپوآكورين (189 اسيد آمينه)، اكسيژن و كوالنترازين (كروموفور ايميدازوپيرازين) تشكيل شده است. عملكرد اين پروتيين نوري در حضور كلسيم، نشر نور آبي (469 نانومتر) است. مطالعات نشان داده است كه سه اسيد آمينه H16، Y82 و W86 در عملكرد و شيفت نوري پروتيين اكورين نقش دارد. در تحقيق حاضر به منظور بررسي ارتباط ساختار- عملكرد پروتيين از جهش‌هاي تركيبي استفاده شد تا نقش و اهميت جايگاه‌هاي مورد نظر، در حالت تك و تركيبي، به‌دست آيد.
مواد و روش‌ها: با استفاده از روش جهش‌هاي هدفمند، جهش‌هاي تكي و تركيبي در پلاسميد مورد نظر انجام گرفت و فوتوپروتيين اكورين در حالات تك جهشي و جهش‌هاي تركيبي، به‌دست آمد. در مرحله بعد پايداري حرارتي و فعاليت نوري پروتيين‌هاي به‌دست آمده با استفاده از لومينومتر، اندازه‌گيري و شيفت نوري آن‌ها با استفاده از اسپكتروفلوريمتر، اندازه‌گيري شد.
يافته‌ها: نتايج حاصله نشان داد كه نقش جايگاه W86 در شيفت نوري و نقش H16 در عملكرد از ساير موقعيت‌هاي ديگر بالاتر است. همچنين پايداري حرارتي جهش اعمال شده در موقعيت W86 نسبت به ساير جهش‌ها عملكرد بهتري را نشان مي‌دهد.
نتيجه‌گيري: اين تحقيق نشان داد كه جايگاه اسيد آمينه W86 در شيفت نوري و پايداري حرارتي اكورين، از Y82 و H16 بالاتر است و مي‌توان از اين جهش جهت توليد پروتيين كاراتر در راستاي حسگري و ساير كاربردهاي مربوطه استفاده نمود.
چكيده لاتين :
Background: Aequorin is a calcium sensitive photoprotein composed of apoaequorin (189 amino acid), oxygen and coelenterazine (imidazopyrazine chromophore). Activity of this photoprotein in calcium presence is blue photon emission (469 nm). Studies have shown that three amino acids H16, Y82, W86 are involved in color shift and activity of Aequorin. In this work, for study of structural-functional relationship, combinational mutant was used for determine of the interest places importance in single and combination state.
Materials and Methods: Using site directed mutagenesis, the single and multiple mutations done in plasmid and mutated aequorin in single and multiple states were prepared. Next, thermostability, activity and color shift of produced protein determined using luminometer and spectrofluorimetry, respectively.
Results: We found that W86 and H16 play a more critical role in color shift and activity respectively. In addition, mutation of W86 provides better termostability compared to other mutations.
Conclusion: This investigation was shown that the role of W86 in aequorin shift light and thermostability is better than Y82 and H16 and this mutant could be used for effective protein production in sensor and other applications.
اطلاعات موجودي :
فصلنامه با شماره پیاپی 0 سال 1394
كلمات كليدي :
#تست#آزمون###امتحان
