تشخيص تعدادي از عوامل باكتريايي سقط جنين در گوسفند افشاري با استفاده ازReal Time PCR و تعيين حساسيت آغازگر مربوط به كمپيلوباكتر

The present a method for fast and accurate detection of abortion bacterial agents is the most priority of control and treatment for this disease. The aim of this study was the optimization of Real Tim

ارايه روشي مناسب براي تشخيص سريع و دقيق باكتري هاي مولد بيماري سقط جنين از اولويت هاي كنترل و درمان به موقع اين بيماري است. هدف از اين تحقيق بهينه كردن يك روش مبتني بر Real Time PCR به صورت همزمان براي چهار باكتري مهم مولد سقط جنين (كمپيلوباكتر، بروسلا، يرسينيا و سالمونلا) بود. تعداد 217 نمونه سواب واژينال (132 نمونه از دام هاي سقط كرده و 85 نمونه از دام هايي كه بره هاي سالم به دنيا آوردند) از گوسفند هاي استان زنجان گرفته شده و براي سه باكتري سالمونلا، يرسينيا و بروسلا نيز نمونه هاي خالص آن ها از مركز جمع آوري قارچ ها و باكتري هاي صنعتي ايران PTCC خريداري شد. پس از استخراج DNA، آغازگر هاي اختصاصي بروسلا، سالمونلا و يرسينيا بر روي نمونه DNA باكتري هاي خريداري شده مورد بررسي قرار گرفتند و پس از مشخص شدن كمپيلوباكتر به عنوان عامل سقط جنين در تعدادي از نمونه هاي استان زنجان (68 نمونه مثبت از 132 دام سقط كرده و 29 نمونه از 85 دام سالم)، دقت آغازگر كمپيلوباكتر در رقت هاي مختلف با استفاده از Real Time PCR نيز سنجيده شد. نتايج اين بررسي نشان داد كه همه باكتري ها در شرايط يكسان با آغازگرهاي اختصاصي خود به صورت همزمان با Real Time PCR قابل تكثير بوده و آغازگر كمپيلوباكتر نيز در تمام رقت هاي ايجاد شده حتي تا يك كپي از ژنوم هم قادر به تشخيص و تكثير باكتري بوده است.

The present a method for fast and accurate detection of abortion bacterial agents is the most priority of control and treatment for this disease. The aim of this study was the optimization of Real Time PCR for simultaneous detection of four of the most important bacteria causing abortion (Campylobacter, Brucella, Yersinia and Salmonella). 217 vaginal swab samples (132 samples from aborted and 85 samples from non-aborted ewes) were collected from some rural regions of Zanjan province. Pure samples of Brucella, Yersinia and Salmonella were also purchased from Persian Type Culture Collection (PTCC). After DNA extraction, specific primers of Brucella, Salmonella and Yersinia were examined on each purchased bacteria DNA sample. With 68 positive samples from 132 aborted ewes and 29 positive samples from 85 healthy ewes, Campylobacter was distinguished as a main factor of abortion in rural areas of Zanjan. The precision of Campylobacters primer was also assessed using Real Time PCR in different dilutions. The results showed that all bacteria in the same condition concurrently were amplified with Real Time PCR using specific primers and Campylobacters primer is able to identify and amplifying of bacteria in all dilutions even when just one copy is available.