مقايسه سطوح مختلف بيان ژنRheb در بافت هاي مختلف بز كركي رايني

Comparison of different levels of Rheb gene expression in different tissues of Raini Cashmir goat

ژن Rheb تحت عنوان ژن اوليه فوري (IEG) براي اولين بار در سال 1994 شناسايي شد كه داراي 184 اسيد آمينه و وزن ملكولي 20497 دالتون است. Rheb متعلق به خانواده Ras است كه چارچوب كربوكسي ترمينال CAAX را كد مي نمايد كه نشان مي دهد پروتيين ممكن است تحت فارنسيلاسيون بعد از ترجمه قرار گيرد. Rheb يك فاكتور تنظيم كننده بالادست مسير سيگنال دهي mTOR است و Rheb-GTP مي تواند mTOR را فعال كند كه القا كننده قوي فسفوريلاسيون S6K1 اندوژنوس در رزيدوهاي تريونين 389، تريونين 421 و سرين 424 مي باشد. بيان بيش از حد Rheb رشد سلولي را تحريك مي كند، در حالي كه توقف بيان Rheb سنتز پروتيين و رشد سلولي را مهار مي كند. بيان بيش از حد Rheb-GAP فعاليت mTOR را مهار مي كند و ناحيه برش عرضي فيبر را در ماهيچه هاي اسكلتي پستانداران كاهش مي-دهد. بين ميواستاتين و مسيرهاي سيگنال دهي mTOR در ماهيچه هاي اسكلتي پستانداران اثرمتقابل وجود دارد. نمونه ها از بافت هاي مغز، قلب، شش، پانكراس، طحال، كليه، كبد و بيضه مربوط به بز كركي رايني تهيه شدند. RNA استخراج شده در دماي منفي80 درجه سانتيگراد نگهداري شد. كيفيت و كميت RNA بررسي و سنتز cDNA انجام شد. واكنش زنجيره اي پليمراز صورت گرفت. محصولات PCR روي ژل آگارز 5/1 درصد الكتروفورز شد و با نرم افزار Gene Tools سطوح مختلف بيان در بافت هاي ذكر شده، مورد بررسي قرار گرفت. نتايج حاصل از اين بررسي نشان داد كه اين ژن در تمامي بافت هاي بررسي شده بيان شده است و بيشترين سطح بيان در بافت كليه و كمترين سطح بيان در بافت هاي پانكراس و بيضه مشاهده شد. نتايج حاصل از تجزيه و تحليل آماري توسط نرم افزار SPSS نشان مي دهد كه بيان ژن Rheb در بز كركي راييني در بين بافت هاي مختلف تفاوت معني داري در سطح 1 درصد دارد. لذا مي توان پيشنهاد كرد كه احتمالا ژن Rheb در سلول هاي بز نقش دارد و بايد در تحقيقات بعدي اين نقش( ها) شناسايي شوند.

Rheb (Ras homolog enriched in brain) gene is originally identified as immediate early gene (IEG) in 1994, encoding 184 amino acids with a deduced molecular mass of 20 497 Da in hippocampus. Rheb belongs to Ras family that encodes a carboxylterminal CAAX box indicating that the protein may undergo post-translational farnesylation. Rheb is an upstream regulatory factor in mTOR signaling pathway and the Rheb-GTP can active mTOR that inducing strong phosphorylation of endogenous S6K1 at residues Thr389, Thr421 and Ser424. Overexpression of Rheb stimulates cell growth while knockdown of Rheb expression inhibits protein synthesis and cell growth in insects. Over expression of Rheb-GAP inhibits mTOR activation and reduces fiber cross-sectional area in mammalian skeletal muscle. There is cross-talk between Mstn and mTOR signaling pathways in mammalian skeletal muscles. Tissues including brain, heart, lung, pancreatic, spleen, kidney, liver and testis were collected from the Raini Cashmir goat after slaughter. Extracted RNA were immediately stored at -80°C. Quality and quantity of RNA were evaluated and cDNA was synthesized and PCR was performed. PCR Products were electrophoresed on 1.5% agarose gel and were evaluated different levels of expression in studied different tissues. Results showed that the Rheb gene was expressed in all the tested tissues and the highest level of expression was observed in kidney and the lowest level was detected in pancreatic and testis. Results of SPSS analyziz demonstrated that expression of Rheb gene in Raini cashmir goat significantly (P?0.01) is different in various tissues. Hence, can suggest that Rheb has probably role in goat cells and must detect in future investigations.