روش مولكولي ساده براي تاييد شناسايي گونه‌هاي اصلي قارچ‌هاي كانديدا، آسپرژيلوس و درماتوفيت

THE SIMPLE MOLECULAR METHOD FOR CONFIRMING IDENTIFICATION OF THE MAIN SPECIES OF FUNGI CANDIDA, ASPERGILLUS AND DERMATOPHYTE

پيش زمينه و هدف: اونيكومايكوزيس توسط درماتوفيت‌ها، مخمرها و كپك‌ها ايجاد مي‌شود. جهت شناسايي عوامل مختلف اين عفونت كه به عنوان يك معضل مهم بهداشتي در جوامع مختلف شناخته شده است بايد روش‌هاي تشخيصي حساس‌تر و نويني جايگزين روش‌هاي معمول گردد. اهداف مشخص اين مطالعه شامل اهداف ويژه و كاربردي است كه عبارتست از تشخيص صحيح، حساس و سريع عوامل مختلف اونيكومايكوزيس با استفاده از روش مولكولي (از محيط كشت براي راه‌يابي كار روي بالين) و همچنين مقايسه حساسيت و دقت PCR با روش‌هاي معمول آزمايش مستقيم و كشت و جلوگيري از موارد منفي كاذب كه در روش‌هاي تشخيصي فعلي ديده مي‌شود. مواد و روش‌ها: اين مطالعه يك بررسي توصيفي ـ تجربي بوده كه روي نمونه‌هاي كشت مايع و جامد استاندارد ترايكوفيتون‌ها، مخمر كانديدا و كپك آسپرژيلوس صورت گرفته است تا راه براي آزمايش مستقيم مولكولي روي نمونه‌هاي باليني بيماران فراهم شود. در اين آزمايش از آغازگرهاي يونيورسال قارچ(ITS1 and ITS4) و اختصاصي ترايكوفايتون روبروم (T-rub) استفاده شد. يافته‌ها: در مطالعه حاضر، براي اولين بار در ايران و با استفاده از پروتكل جديد، ظرف 2 ساعت استخراج مستقيم DNA از نمونه‌هاي كشت ياد شده صورت گرفت. همچنين مقايسه نتايج روش‌هاي آزمايشگاهي معمول مثل آزمايش مستقيم و كشت با روش PCR حساسيت و دقت بسيار زياد آن را نسبت به روش‌هاي ياد شده به اثبات مي‌رساند. نتيجه‌گيري: اين روش مي‌تواند در آينده با سرعت و دقتي كه دارد جايگزين بسيار مناسب و دقيق روش‌هاي معمول كشت و آزمايش مستقيم در نمونه‌هاي باليني اونيكومايكوزيس باشد.

Background & Aims: Onychomycosis is caused by dermatophytes, yeasts, and molds. The term onychomycosis refers to nail infections caused by dermatophyte and non-dermatophyte fungi. The aim of this study was diagnosis of onychomycosis agents and also comparison of the accuracy and sensitivity of PCR to conventional methods such as direct examination and culture. Materials & Methods: Our descriptive-experimental research is based on the usage of standard solid and liquid cultures of Trichophyton, Candida and Aspergillus for molecular testing on clinical specimens from patients. Universal fungal primers (ITS1 & ITS4) and specific Trichophyton rubrum primers (T-rub) were applied in this experiment. Results: For the first time in Iran using an innovative protocol, direct DNA extraction and PCR confirmation of mediums mentioned above was performed in two hours. Furthermore, better sensitivity and precision of PCR rather than routine laboratory results such as direct examination and culture have been proved. Conclusion: Due to the high speed and precision of PCR method, it can be a convenient alternative for conventional methods such as direct examination and culture on clinical samples of onychomycosis.