ساخت سازهpEGFP-ChEgTrp به عنوان مدل DNA واكسن چند اپيتوپي عليه اكينوكوكوس گرانولوزوس

Construction of pEGFP-ChEgTrp as DNA model for multi-epitope vaccine against Echinococcus granulosus

زمينه: آلودگي با لارو انگل اكينوكوكوس گرانولوزوس سبب بيماري هيداتيدوزيس در انسان و نشخواركنندگان مي شود. با توجه به شيوع بالاي اين آلودگي در ايران، مقابله با آن از لحاظ بهداشت جامعه اهميت خاصي دارد. هدف: مطالعه به منظور توليد و ساخت سازه pEGFP-ChEgTrp به عنوان مدل DNA واكسن چند اپيتوپي عليه انگل اكينوكوكوس گرانولوزوس انجام شد. مواد و روش ها: اين مطالعه تجربي در سال 1392در موسسه تحقيقاتي واكسن و سرم سازي رازي كرج انجام شد. ابتدا اپيتوپ هاي تحريك-كننده سيستم ايمني ميزبان با استفاده از پايگاه اطلاعاتي IEDB پيش بيني و توالي كد كننده آن ساخته شد. سپس اين توالي با استفاده از واكنش PCR تكثير شد. محصول PCR پس از هضم آنزيمي با آنزيم محدود كننده XhoI در وكتور pEGFP-N1 كلون شد و باكتري حاوي پلاسميد نوتركيب با روش هاي مختلف از قبيل PCR Colony، الكتروفورز آگارز ژل و توالي يابي بررسي گرديد. يافته ها: تعداد 4 پپتيد حاوي 10 اپيتوپ خطي در آنتي ژن EgTrpپيش بيني شد. توالي نوكليوتيدي كد كننده ChEgTrp با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي و با روش PCR تكثير و قطعه اي شامل 270 جفت باز حاصل شد. قطعه مورد نظر وارد وكتور pEGFP-N1 گرديد و پلاسميد نوتركيب با روشColony PCR و الكتروفورز آگارز ژل تاييد شد. براي تاييد نهايي، پلاسميد نوتركيب توالي يابي و به اين ترتيب سازه ژنتيكي pEGFP-ChEgTrp ساخته شد. نتيجه گيري: قطعه ChEgTrp به طور موفقيت آميزي در وكتور pEGFP-N1 كلون شد و اين پلاسميد مي تواند جهت ساخت DNA واكسن استفاده شود.

Background: Infection with Echinococcus granulosus causes hydatidosis in human and ruminants. With regards to the high prevalence of hydatidosis in Iran, dealing with this disease is important in terms of public health. Objective: The aim of this study was to construct pEGFP-ChEgTrp as DNA model for multi-epitope vaccine against Echinococcus granulosus Methods: This experimental study was conducted in the Razi Vaccine & Serum Research Institute, Karaj in 2013. Initially, epitopes stimulating the host immune response were predicted by IEDB Database and the coding sequences were made. The sequences were amplified by PCR. The PCR products were cloned into pEGFP-N1 vector after digestion with XhoI restriction enzyme. The bacteria containing recombinant plasmid were evaluated using Colony PCR, agarose gel electrophoresis and sequencing methods. Findings: Four peptides with 10 linear epitopes were predicted in EgTrp antigen. The nucleotide sequence coding ChEgTrp was amplified by PCR using specific primers and a 270 bp fragment was obtained. This fragment was cloned into pEGFP-N1 vector and the recombinant plasmid was confirmed by Colony PCR and agarose gel electrophoresis. For final confirmation, the recombinant plasmid was sequenced and the pEGFP-ChEgTrp was constructed. Conclusion: The ChEgTrp was successfully cloned into the pEGFP-N1 vector and this plasmid can be used to design DNA vaccines.