مطالعه‌ الگوي متيلاسيونDNA در پروموتر ژن بازدارنده‌ تومورRASSF1A در دو رده‌ سلولي سرطان پستان

Study of DNA Methylation Pattern at the Tumor Suppressor Gene RASSF1A Promoter in Two Breast Cancer Cell Lines

چكيده مقدمه: سرطان پستان يك تهديد عمده‌ براي سلامتي زنان سراسر جهان مي‌باشد و پيشرفت‌هايي در توانايي ما براي جلوگيري، تشخيص و درمان اين بيماري نياز به درك بيشتري از پايه و اساس مولكولي ايجاد سرطان پستان دارد. بررسي متيلاسيون ژن‌هاي چرخه‌ سلولي مي‌تواند به‌عنوان يك شيوه براي شناسايي كردن ژن‌هاي مهم در تومورزايي استفاده شود و ارزش تشخيصي/ پيش‌آگهي‌دهنده داشته باشد. هدف اين مطالعه بررسي وضعيت متيلاسيون پروموتر RASSF1A، به عنوان يك ژن تنظيم‌كننده‌ چرخه سلولي، در دو رده‌ سلولي سرطان پستان است. روش بررسي: در اين پژوهش بنيادي از تكنيك MSP (PCR اختصاصي متيلاسيون) كه روشي كيفي است، به منظور تعيين الگوي متيلاسيون پروموتر RASSF1A در دو رده‌ سلولي سرطان پستان (MCF-7 و MDA-MB-231) استفاده شد. اين روش مستلزم تغيير اوليه‌ DNA به‌وسيله‌ سديم ‌بي‌سولفيت، تبديل همه‌ سيتوزين‌هاي غيرمتيله، اما نه متيله، به اوراسيل و پس از آن تكثير با پرايمرهاي اختصاصي براي DNA متيله و غيرمتيله مي‌باشد. يافته‌ها: نتايج MSP نشان مي‌دهند كه در هر دو رده سلولي MCF-7 و MDA-MB-231، بدون توجه به زيرگروه مولكولي آنها، پروموتر ژن سركوب‌گر تومور RASSF1A كاملاً متيله مي‌باشد. فقدان باند غيرمتيله در هر دو رده‌ سلولي مذكور نيز نشان‌دهنده‌ اين امر است. نتيجه‌گيري: اين يافته‌ها تاييد مي‌كنند كه هيپرمتيلاسيون ناحيه‌ پروموتر RASSF1A ممكن است نقش مهمي را در پاتوژنز سرطان پستان ايفا كند. با در نظر گرفتن اينكه تغييرات اپي‌ژنتيكي برگشت‌پذير هستند، غربالگري براي الگوهاي متيلاسيون نابهنجار جايگاه‌هاي CpG در پروموتر ژن‌هاي ضروري در طي فرآيند تومورزايي، مانند ژن‌هاي چرخه‌ سلولي، مي‌توانند در توسعه و كاربرد عوامل درماني هدف‌گيري‌كننده‌ اين تغييرات در سرطان‌هاي پستان انساني موثر باشند. واژه‌هاي كليدي: سرطان پستان، ژن‌هاي چرخه‌ سلولي، الگوهاي متيلاسيون نابهنجار، پروموتر ژن سركوب‌گر تومور RASSF1A.

Abstract Introduction: Breast cancer represents a significant health problem in women worldwide and improvements in our ability to prevent, diagnose, and treat the disease requires a greater understanding of the molecular basis of breast carcinogenesis. Methylation analysis of cell cycle genes can be used as a way of identifying important genes in tumorigenesis and can have diagnostic/prognostic value. The aim of this study was to investigate the methylation status of RASSF1A promoter, as a cell cycle regulatory gene, in two breast cancer cell lines. Method: In this basic research, MSP (methylation-specific PCR) was used as a qualitative method to assess the methylation pattern of RASSF1A promoter in two breast cancer cell lines (MCF-7 and MDA-MB-231). This method involves initial modification of DNA by sodium bisulfite, converting all unmethylated, but not methylated, cytosines to uracil, and subsequent amplification with primers specific for methylated and unmethylated DNA. Results: MSP results show that in both MCF-7 and MDA-MB-231 cell lines, regardless of their molecular subtype, promoter of the tumor suppressor gene RASSF1A is completely methylated. The lack of unmethylated band in both mentioned cell lines also indicate this issue. Conclusion: These findings confirm that RASSF1A promoter region hypermethylation may play an important role in breast cancer pathogenesis. Considering that epigenetic changes are reversible, screening for aberrant methylation patterns of CpG sites within the promoter of essential genes during the tumorigenic process, such as cell cycle genes, can contribute to the development and application of therapeutic agents targeting these alterations in human breast cancers. Key words: Breast Cancer, Cell Cycle Genes, Aberrant Methylation Patterns, Promoter of the Tumor Suppressor Gene RASSF1A.