خصوصيات فنوتيپي و ژنوتيپيErwinia amylovora جدا شده از درختان ميوه دانه دار با استفاده از rep-PCR در استان اصفهان

Phenotypic and Genotypic Characterization of Erwinia amylovora in Pome Fruit Orchards in Isfahan Province

چكيده از مهر ماه 1390 تا شهريور 1391 از باغ هاي درختان سيب،به و گلابي كه سوختگي سر شاخه و برگ نشان مي دادند در مناطق مختلف استان اصفهان نمونه برداري شد. 49 جدايه روي محيط كشت هايNA،SNA وEMB از باغ هاي آلوده جداسازي و بر اساس آزمون هاي استاندارد باكتري شناسي به عنوان Erwinia amylovora تشخيص داده شدند.همچنين جدايه هاي حاصله از لحاظ خصوصيات فنوتيپي، فيزيولوژيكي، بيوشيميايي، تغذيه اي، دامنه ميزباني، اندازه قطعات DNA تكثيري با استفاده از آغازگرهاي اختصاصيA/B و نيز خصوصيات ژنوتيپي در آزمون rep-PCR با استفاده از آغازگرهاي سه گانه BOX، ERIC و REP مورد بررسي قرار گرفتند. واكنش فوق حساسيت روي توتون و شمعداني در تمام جدايه ها مثبت ارزيابي شد. در مايه زني جدايه ها روي گلابي نارس لكه هاي قهوه اي تا سياه رنگ در اطراف محل مايه زني ديده شد. در آزمون رديابي بيمارگر با استفاده از آغازگر اختصاصي A/B، كليه جدايه ها قطعه اي DNA با اندازه تقريبي1000 جفت باز را سنتز كردند. در تجزيه و تحليل داده هاي فنوتيپي و ژنوتيپي حاصل از rep-PCR گروه بندي خاصي مشاهده نشد. علاوه بر اين آناليز نتايج آزمون هاي فنوتيپي و ژنوتيپي با استفاده از rep-PCR يكنواختي زيادي را در ميان سويه هاي اين باكتري در استان نشان داد و كليه جدايه ها صرف نظر از ميزبان از71% همولوژي با يكديگر برخوردار بودند. واژه هاي كليدي:آتشك درختان ميوه دانه دار، آغازگر A/B، Erwinia amylovora، rep-PCR.

Abstract During 2011 to 2012, different Pome orchards in Isfahan province were surveyed and the samples with fire blight symptoms such as water soaking of infected tissues, necrosis, wilt and tissue necrosis, scorched and in some cases death of the entire tree, were collected. Forty nine bacterial strains were isolated using NA, SNA and EMB media. Based on standard physiological and biochemical tests, the isolates were identified as Erwinia amylovora. In the PCR assayisolates were identified as E. amylovora, based on 1000 bp DNA fragments using A/B specific primers. In rep-PCR assay representative strains produced different fingerprints patterns using REP, ERIC, BOX primers. The results of this study demonstrated that fire blight disease is distributed in Isfahan province and collected E. amylovora strains from various regions of Isfahan province are genotypically homogenous with more than 71% similarity. Keywords: Erwinia amylovora, Fire blight, Isfahan, rep-PCR.