استخراج آنزيم ليپاز از روده ماهي قزل‎آلاي رنگين كمان (Oncorhynchus mykiss) و بررسي اثر بازدارنده‎ها و فلزات بر فعاليت آن

Extraction of lipase from the intestine of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) and effects of inhibitors and metals on its activity

آبزيان از جمله منابع مهم جهت استخراج تركيبات با ارزشي مانند آنزيم مي‎باشند. در اين پژوهش آنزيم ليپاز از روده ماهي قزل‎آلاي رنگين كمان استخراج شد و مورد بررسي قرار گرفت. جهت استخراج اين آنزيم، چربي‎زدايي چندين بار با استون انجام شد سپس براي رها‎سازي آنزيم از آمونيوم سولفات (با اشباعيت 60 درصد) استفاده گرديد و پس از آن جهت تغليظ نمونه، اولترافيلتراسيون انجام گرفت. تخليص نهايي آنزيم نيز با عبور نمونه از ستون كروماتوگرافي ژل فيلتراسيون سفادكس جي-75 انجام شد. پس از استخراج، اثر دو بازدارنده فنيل ‎متيل سولفونيل فلورايد و اتيلن ديامين تترا استيك اسيد بر فعاليت ليپاز مورد بررسي قرار گرفت. سنجش فعاليت آنزيم با استفاده از سوبستراي پارانيتروفنيل پالميتات انجام شد. نتايج نشان داد كه فنيل متيل سولفونيل فلورايد و اتيلن ديامين تترا استيك اسيد اثر بازدارندگي معني‎داري بر فعاليت آنزيم ليپاز تخليص شده دارند (05/0 > P) يون‎هاي CaCl2، MgCl2 و MnCl2 بطور معني‎داري فعاليت آنزيم ليپاز را افزايش (05/0 > P) و KCl و NaCl نيز به طور معني داري فعاليت را كاهش دادند (05/0 > P). بنابراين در مورد استفاده از ليپاز روده قزل‏آلاي رنگين كمان به عنوان افزودني در صنايع مرتبط، از اين بازدارنده‎ها و فلزات مي‎توان جهت بازداشتن يا افزايش فعاليت آنزيم استفاده كرد.

Aquatic animals are important resources for extraction of valuable compounds such as enzymes. In this study, lipase was extracted from the intestine of rainbow trout. Samples were defatted with acetone several times; ammonium sulphate (60%) was used for precipitation followed by ultrafiltration for concentrating the samples. The final purification of the enzyme was performed by passing of the samples through G-75 column chromatography. After extraction, effects of two inhibitors were investigated on the activity of the enzyme. The enzyme activity was assayed by p-nitrophenyl palmitate as a substrate. The results showed that Ethylenediaminetetraacetic acid and Phenylmethylsulfonyl fluoride had significant inhibitory effects on the lipase activity (P < 0.05). MnCl2, CaCl2 and MgCl2 significantly increased the lipase activity (P < 0.05), while KCl and NaCl decreased the activity (P < 0.05). So when intestinal lipase of rainbow trout is used as an additive in related industries, these inhibitors can be used for inhibiting enzyme activity.